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肿瘤相关基因的克隆和结构确定

张睿  
【摘要】:食管癌分化相关基因的克隆和结构确定 我室对肿瘤细胞分化的分子机制进行了许多研究,已分离到多个具有抑制肿瘤细胞生长和促肿瘤细胞分化的新基因,进一步研究发现,肿瘤细胞分化是多基因共同参与的过程,既涉及细胞核基因组编码基因也涉及线粒体基因组编码基因。全反式维甲酸(ATRA)处理激活了维甲酸受体所介导的维甲酸信号传导通路,并调控着食管癌细胞中多个靶基因的表达,涉及细胞内多种生物学过程。采用AP-PCR技术对ATRA诱导的差异表达基因进行分离,并对差异基因进行了结构确定。 本研究发现,ATRA抑制人N-乙基马来酰亚胺敏感因子(NSF)基因的表达。NSF在酵母细胞的同源基因在囊泡转运系统中发挥重要作用。NSF基因不但在胎儿及成人脑、心、肝、脾、肾、胎盘、视网膜、扁桃体、成纤维细胞、睾丸、子宫、肺、角质上皮细胞、黑素细胞等正常细胞组织中表达,也表达于甲状腺癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、脑神经节瘤、类癌等肿瘤组织。有研究发现,囊泡转运系统在人正常肾上皮细胞分化过程中发挥作用,囊泡转运系统转运活性的改变与肿瘤细胞的分化有关,然而其机制尚不清楚。本研究为肿瘤细胞分化过程中囊泡转运系统转运活性的变化提供了分子机制。囊泡转运系统转运活性下降在食管癌细胞分化过程中发挥着重要作用。 我们所做的Northern杂交结果表明,人NSF基因mRNA大小约为4.2kb,而Genbank中已知cDNA序列约为2kb,大部分序列有待确定。随着人EST随机测序的进展,几倍于人所有基因mRNA总长的EST已被测序并输入Genbank,人基因总数的一半以上已被定位于染色体。据估计,绝大多数基因的部分cDNA序列在基因数据库被登录。确定基因的全长cDNA序列是确定基因所编码的氨基酸序列及进行功能研究的前提。充分利用数据库中已有序列资源


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