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人的可溶性白细胞介素1受体I型(hsIL-1RI)在链霉菌中的表达

张华  
【摘要】:白细胞介素1是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与胞膜上的白细胞介素1受体Ⅰ型结合,启动其生物信号的传导。白细胞介素1参与多种病理变化过程。降低白细胞介素1的作用已成为一种治疗这些疾病的方法。白细胞介素1受体Ⅰ型经蛋白酶切割后,其胞外部分即形成可溶性的白细胞介素1受体Ⅰ型(sIL-1RI)。sIL-1RI能与IL-1结合,作为一种IL-1RI的拮抗剂用于一些疾病的治疗,也可作为靶点用于IL-1RI拮抗剂的筛选。本工作是以链霉菌为表达系统,克隆并表达人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型。 pSGL1是本实验室从S.globisporus中分离到的一新质粒。为了将该质粒发展成有用的克隆载体,本工作首先测定了该质粒的最小复制子核苷酸序列,经检索是一个新的序列,并且确定了其属于滚环复制类型的质粒;然后以S.globisportis总DNA为模板,采用PCR方法扩增得到含有C1027前蛋白信号肽gpp及其调控序列的DNA片段;将其插入pSGL1的衍生质粒pSGLN,构建了新的链霉菌-大肠杆菌穿梭质粒载体pSGLgpp。 从HepG2细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增得到人的可溶性白细胞介素1受体Ⅰ型(sIL-1RI)的cDNA,经序列测定表明结果正确。sIL-1RI cDNA与酪蛋白酶melC1信号肽序列的片段融合后,将该融合基因克隆至链霉菌载体pIJ702;同时将sIL-1RIcDNA克隆至我们自行构建的新型链霉菌-大肠杆菌穿梭质粒载体pSGLgpp信号肽gpp下游。Southern杂交证明所得到的两个重组质粒中插入了sIL-1RI cDNA的片段。 为了观察gpp和melC1信号肽调控序列启动sIL-1RI的分泌表达,将获得的重组菌株分别在酪蛋白发酵培养基中发酵到72hr,于24hr,48hr和72hr取样。发酵液经SDS-PAGE和Western blot证实分泌表达了sIL-1RI,经蛋白印迹受体配基结合反应证实分泌表达的sIL-1RI具有配基受体结合的生物学活性。结果表明sIL-1RI的表达于72hr胞外达到最高表达量。信号肽gpp和melC1均能启动分泌表达sIL-1RI,但是在前者的调控序列启动下sIL-1RI的表达水平似高于后者。


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1 Deng Z;张泉渡;张玉泉;;链霉菌质粒启动基因在大肠杆菌中的表达[J];国外医学.药学分册;1988年02期
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6 刘颐屏;链霉菌质体(质粒)研究的进展[J];中国抗生素杂志;1979年06期
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12 闫芝芬;链霉菌遗传工程产生杂合抗生素[J];国外医药.抗生素分册;1995年05期
13 饶又启;;中杀菌素链霉菌中的多烯抗生素[J];国外医药.植物药分册;2008年01期
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15 ;从链霉菌菌丝体制备三磷酸腺甙[J];中国医药工业杂志;1976年09期
16 ;链霉菌74-10204及其产生的抗菌素的初步研究[J];中国医药工业杂志;1976年10期
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19 陈长华,李卫;螺旋霉素链霉菌在不同氮源中的代谢[J];中国抗生素杂志;1994年04期
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1 覃重军;沈美娟;焦瑞身;Stanley N.Cohen;;链霉菌线型质粒pSLA2复制相关基因kilccc的鉴定及功能分析[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
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1 张华;人的可溶性白细胞介素1受体I型(hsIL-1RI)在链霉菌中的表达[D];中国协和医科大学;1999年
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1 记者  陈超;大肠杆菌有望制成生物微型马达[N];科技日报;2006年
2 裴那;Oxoid公司推出快速确认食品中大肠杆菌的方法[N];中国医药报;2009年
3 沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;2011年
4 陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;2006年
5 ;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;2001年
6 编译 王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;2005年
7 邢台沙河市动物防疫监督站褡裢分站 陈建斌;雏鸡新城疫与大肠杆菌、支原体混感,咋治?[N];河北农民报;2007年
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9 冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;2006年
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