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CD2胞内区结合蛋白的分子克隆及功能研究

邵源  
【摘要】:CD2具有调节T淋巴细胞成熟、分化、激活和凋亡等功能,是介导淋巴细胞信号传递和细胞间粘附作用的重要免疫分子。为了阐明CD2在细胞激活与凋亡中的重要作用及其免疫学意义,本论文进行了以下几个方面的工作: 1 建立了酵母双杂交系统,以CD2分子胞内区为钓饵,筛选了人T淋巴细胞KT3 cDNA文库,获得了一个与CD2胞内区结合的胞内蛋白,命名为CD2cBP,此蛋白与v-fos转化效应蛋白(Fte-1)同源。 2 利用免疫共沉淀法证明,在哺乳动物细胞内,CD2cBP特异地与CD2胞内区结合。 3 利用5'-RACE及RT-PCR方法证实,人外周血淋巴细胞及Jurkat T淋巴细胞中均有CD2cBP和其同源蛋白Fte-1的表达,并用RT-PCR方法获得了人外周血淋巴细胞Fte-1的全长cDNA,为进一步比较和研究CD2cBP及Fte-1的功能打下基础。 4 以佛波酯PMA激活内源性PKC和从大鼠脑组织内提取的外源性PKC分别从细胞内、外两个角度证明了PKC可使CD2cBP及其同源蛋白Fte-1磷酸化,该磷酸化作用可以被PKC的特异抑制剂抑制。 5 利用绿色荧光蛋白与CD2cBP融合,观察了CD2cBP在Jurkat T淋巴细胞内的定位,发现CD2cBP在细胞胞浆内均匀分布,在抗CD2单克隆抗体刺激下,CD2cBP向胞膜内侧区域聚集,推测此趋向性变化有利于CD2cBP与CD2分子胞内区结合,并可能与PKC磷酸化有关。 6 CD2cBP的功能研究表明,CD2cBP和Fte-1在Jurkat T淋巴细胞


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