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同型半胱氨酸与冠心病的相关性及其抑制纤溶系统的发病机制研究

方理刚  
【摘要】:同型半胱氨酸(HCY)是一种含巯基氨基酸,现有临床资料表明血浆HCY轻、中度升高可能是心血管疾病的一个重要危险因素,HCY导致血管病变的机制尚不清楚。近年来的研究表明,参与HCY转甲基途径的亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因编码序列C677T突变可引起血浆HCY的升高,此外叶酸、VitB_(12),对HCY的血浓度变化起重要作用。目前,国内有关HCY的研究资料较少。本研究观察高HCY血症是否为中国人冠心病(CAD)的一个独立危险因素,以及探讨MTHFR基因多态性和冠心病的联系,并分析HCY、叶酸和MTHFR基因多态性间的相互关系。血管内皮受损时,纤溶抑制因子PAI-1和胞内游离钙[Ca~(2+)]i升高,与冠脉内血栓形成与冠心病的发生发展密切相关,已有资料表明高HCY水平可引起血管内皮功能受损,本研究观察HCY对血管内皮细胞PAI-1活性及其mRNA的影响,并观察HCY对单个血管内皮细胞[Ca~(2+)]i的影响,以探讨HCY致心血管病变的可能机制。 本研究选择冠心病患者161例,其中154例经冠状动脉造影分为1、2、3支病变组,正常对照125例。应用荧光偏振免疫法测定血浆HCY放免法测定血清叶酸、VitB_(12),酚-氯仿法提取基因组DNA,并用多聚酶链反应(PCR)、HinfI酶切消化及琼脂糖凝胶电泳方法确定MTHFR基因多态性。进行人脐静脉内皮细胞株ECV304培养,用发色底物法测定细胞上清的PAI-1活性,以及细胞原位杂交及辉度扫描检测PAI-1 mRNA水平。进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养,用激光扫描共聚焦显微镜观察HCY对单个HUVEC胞内[Ca~(2+)]i的影响及钙通道阻断剂的干预作用。


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