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介入治疗缺血性脑血管病的基础实验及临床研究

张晓波  
【摘要】:研究背景和目的: 缺血性脑血管病是严重影响人类生命及生活质量的常见病,具有高发病率、高致残率及高复发率的特点。不仅给病人的身体造成痛苦,也带来了沉重的社会及经济负担,所以日益受到政府和医学界的重视。从近年关于脑缺血的文献中可以发现,一方面对其机制的了解越来越深入;另一方面,有效的治疗手段仍然缺乏,因此也就迫切需要研究新的治疗方法。本文从基础和临床两方面对缺血性脑血管病的治疗进行研究,希望在这一领域有所收获。 一、基础实验部分: 【目的】 研究HGF基因转染大鼠急性脑卒中模型后的表达情况及其生物学效应。 【材料方法】 1、利用线栓法建立了稳定、可控的大鼠局部脑缺血模型,并通过CT灌注扫描及TTC染色对模型进行评价。 2、以胎肝cDNA文库为模板,克隆出HGF基因,并通过酶切、连接等手段构建携带有HGF基因的真核表达质粒pIRES2—EGFP—HGF,该质粒同时携带绿色荧光蛋白(EGFP)标记基因。 3、体外转染实验:利用脂质体介导的方式,将质粒转染原代培养的大鼠神经细胞,通过对照,研究其表达情况。细胞被分成三组:(1)转染pIRES2—EGFP—HGF的实验组;(2)转染pIRES2—EGFP的对照组;(3)空白对照组 4、动物体内转染实验:将构建的pIRES2—EGFP—HGF质粒与脂质体混合,立体定向下多点注射到缺血半暗带区域,转染7天后断头取脑,切片观察HGF基因在大鼠脑内的表达情况,并采用兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体进行免疫组化染色,显微镜下随机计数5个高倍视野下缺血半暗带区血管数量。同时在基因转染


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