收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

ARF1和CREG在压力负荷诱导心肌肥厚中的作用

徐丽  
【摘要】:目的:ADP-ribosylation factor 1(ARE1)是ARF家族的一种小G蛋白,是COP1(coat proteins 1)小泡和网格蛋白所包被的小泡的组成部分和调节分子,同时它还是许多信号分子的调节因子。但是它在心脏细胞中的作用还未被研究。通过基因芯片方法,我们发现ARF1在压力负荷型大鼠的心脏内表达升高,在前期工作的基础上,我们分离并克隆了大鼠的ARF1基因,并对它的功能进行了初步的研究。 方法:(1)用腹主动脉缩窄的方法建立大鼠心肌肥厚的体内模型。(2)用牵张诱导的方法建立心肌细胞肥大的体外模型。(3)ARF1蛋白具有两种不同的结构形式,一种是结合GTP的活性状态,一种是结合GDP的无活性状态。这两种形式主要由ARF1-GTP酶激活蛋白(GTPase-activating protein,GAP)和ARF-鸟嘌呤交换因子(guanine nucleotide exchange factor,GEF)进行调节,前者使ARF1处于结合GDP状态,后者使ARF1处于结合GTP状态,本文采用腺病毒介导表达正义ARF1、反义ARF1、正义GAP和反义GAP,以及用ARF-GEF抑制剂BFA(brefeldin A)从五个方面研究ARF1基因的作用。(4)通过Northern印迹杂交的方法检测ARF1在心肌肥厚大鼠中的表达变化。(5)运用Western杂交的方法分析以下信号分子的表达变化:PKCα、PKCβ_1、PKCβ_2、PKC γ、PKCε、PKC δ、ERK1/2、JNK1/2、P38、P53、Bax、Bcl2和Fas。(6)四甲基耦氮唑盐微量酶反应比色法(methylthiazoletetrazolium,MTT)检测心脏细胞的数量。 结果:(1)大鼠在手术28天和56天后,腹主动脉缩窄手术组和假手术组的颈动脉收缩压(mmHg)依次是108.9±8.7 vs 86.9±6.6(p<0.01)和109.7±8.1 vs 84.4±5.8(p<0.01)。心肌细胞的面积(μm~2)依次是301.2±32.2 vs 240.7±19.9(p<0.01)和335.7±23.0 vs 263.7±11.4(p<0.01)。从术后28天和56天的手术组血压和细胞面积均较假手术组明显升高,二者的一致性表明已成功地建立了压力负荷诱导的心肌肥厚的大鼠模型。(2)乳鼠心肌细胞在20%牵张度时,从2h至72h,随着牵张时间的延长,心肌细胞的总蛋白质含量逐渐增加;心肌细胞从牵张1h后,c-fos蛋白水平迅速增加。这些结果说明我们已成功建立牵张诱导的心肌细胞肥大的体外模型。(3)Northern印迹杂交显示ARF1基因在大鼠肾脏、肝脏、大脑、心脏以及骨髂肌中都表达。其中在心脏中的表达量最高,大约比肝脏多两倍,比其它三种组织多一倍。(4)心肌肥厚大鼠心脏的ARF1 mRNA水平随着压力负荷时间的增长而逐渐增加,与假手术组比较,在手术后28天和56天,ARF1 mRNA水平分别增长了15%和30%(p<0.05)。(5)成功构建了正义和反义表达ARF1和GAP的腺病毒表达载体。与对照(未感染腺病毒、未加BFA)细胞比,乳鼠心肌细胞被表达正义ARF1、反义ARF1、正义GAP和反义GAP的腺病毒感染或BFA作用后,[用增加(+)或降低(-)的百分比(%)表示变化程度]蛋白质含量的变化依次是+13、-28、-18、+20和-28(p<0.05),细胞面积的变化依次是+9、-7、-19、+26和-30(p<0.05)。乳鼠成纤维细胞被感染病毒后,蛋白质含量无变化(p>0.05),用BFA处理后蛋白质含量减少8%(p<0.05)。(6)MTT法分析心肌细胞数量发现,与对照(未感染腺病毒、未加BFA)细胞比,乳鼠成纤维细胞被表达正义ARF1、反义ARF1、正义GAP和反义GAP的腺病毒感染或BFA作用后,细胞数量的增加(+)或降低(-)的百分比(%)依次是20、-11、-15、15和-21;在相同条件下心肌细胞的数量无变化。(7)Western印迹杂交显示,与对照(未感染腺病毒、未加BFA)细胞相比,乳鼠心肌细胞被表达正义ARF1、反义ARF1、正义GAP和反义GAP的腺病毒感染或BFA作用后,


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 姚文娟;韩淑英;宋会双;;荞麦花叶总黄酮对大鼠急性压力负荷c-fos蛋白表达的影响[J];第四军医大学学报;2006年07期
2 蔡辉;沈思钰;董晓蕾;张永文;赵智明;张群燕;;压力负荷增加大鼠模型血浆血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平的改变[J];中西医结合心脑血管病杂志;2010年01期
3 潘德思,田靫 ,陈兰英;关于心肌肥厚发生机制的探讨[J];生理科学进展;1999年02期
4 陈兰英;心脏肾素-血管紧张素系统与心肌肥厚[J];心血管病学进展;1996年06期
5 赵赫男,李深,姜妙娜,王彦,刘敏,季小鹏,贾玉杰;心肌营养素-1上调大鼠心肌转录因子GATA4 mRNA的表达[J];大连医科大学学报;2005年05期
6 章叶静;单江;项美香;程刚;王士生;;苦参碱对压力负荷增高性心肌TGF-β1的作用[J];科技通报;2007年01期
7 李香华;王洪新;王秋宁;;黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌肥大的保护作用[J];中国动脉硬化杂志;2010年11期
8 秦晓同;贾春文;潘闽;沈爱国;景宏美;;阿托伐他汀对压力负荷心肌肥厚大鼠血管紧张素转换酶2表达的干预研究[J];中南大学学报(医学版);2008年05期
9 史君;王静;王星;李春跃;;压力超负荷心肌肥厚过程中外周血CGRP NPY的变化[J];内蒙古医学杂志;2010年06期
10 彭章平;黄元伟;;非对称性室间隔肥厚的临床意义[J];心血管病学进展;1993年02期
11 曾量波,梁子敬,王鹏鲲,叶政,陈国勤,卢敏俊;阿司匹林对压力负荷性心肌肥厚大鼠左心室重构的影响[J];中国临床药理学与治疗学;2005年07期
12 杨维;叶平;;PPARγ及其激动剂与心肌肥厚的基础研究进展[J];中华老年心脑血管病杂志;2006年02期
13 桂树杰;杨玉雯;;转化生长因子β_1介导的心肌肥厚发生机制研究进展[J];国际老年医学杂志;2010年06期
14 ;科技期刊亮点[J];科技导报;2011年21期
15 李健,田靫,陈兰英;压力负荷型心肌肥厚相关的细胞色素b基因的筛选及克隆[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年06期
16 王曙霞;惠汝太;;心肌肥厚信号传导通路的研究进展[J];中国分子心脏病学杂志;2006年06期
17 余志斌;王云英;张然;刘梅;;心肌肥厚过程中PKC的双刃剑作用[J];生理科学进展;2007年04期
18 刘慧敏;王浩;;钙介导的信号转导途径与心肌肥厚[J];山东医药;2008年46期
19 李永勤,高广道,楚雍烈,巩晓宏;压力负荷及容量负荷性肥厚心肌中血管紧张素Ⅱ-1型受体mRNA表达的变化[J];西安医科大学学报(中文版);1999年02期
20 廉秋芳;朱继金;;高血压左心室肥厚的研究进展[J];实用诊断与治疗杂志;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李青;宋晓伟;邹俊;朱霓;袁文俊;荆清;秦永文;;microRNA通过靶向细胞骨架调节蛋白抑制心肌肥厚[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
2 刘艳;王姝;韩红梅;范凯;杨宝峰;;M_3受体与心肌肥厚相关性的实验研究[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
3 洪缨;侯家玉;孙建宁;王晶;张硕峰;;儿茶酚胺类物质与药物的抗心肌肥厚作用[A];2003全国中青年药理学英文学术报告会论文摘要汇编[C];2003年
4 张惠;张幼怡;;STAT3激活参与α_1-肾上腺素受体引起的心肌肥厚[A];2008心血管药理学术研讨会论文汇编[C];2008年
5 单志新;林秋雄;朱杰宁;余细勇;;miR-1调控CDK6的表达在心肌肥厚中的作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
6 李平;李劲梁;冯新恒;李昭屏;韩启德;张幼怡;;不同剂量洛沙坦对心肌肥厚基因表达谱变化的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
7 李平;李劲梁;冯新恒;李昭屏;韩启德;张幼怡;;不同剂量洛沙坦对心肌肥厚基因表达谱变化的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
8 吴扬;刘霞;;卡托普利防治心肌肥厚的效应及其机理探讨[A];加入WTO和中国科技与可持续发展——挑战与机遇、责任和对策(下册)[C];2002年
9 杨丽霞;王先梅;宋武战;祝善俊;齐峰;郭传明;石燕昆;赵颖;;心脏糜酶活性改变在心肌肥厚患者心肌纤维化中的意义[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年
10 高嵩丹;支建明;赵荣瑞;;大鼠心脏多巴胺D_1受体与心肌肥厚的关系[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐丽;ARF1和CREG在压力负荷诱导心肌肥厚中的作用[D];中国协和医科大学;2004年
2 何华;心肌肥厚、肥厚—逆转和慢性心力衰竭心肌中PKCε信号复合物的蛋白质组学研究[D];中国协和医科大学;2006年
3 潘德思;应用差减杂交法分离大鼠压力负荷型心肌肥厚的相关基因[D];中国协和医科大学;1999年
4 王爱兵;异丹叶大黄素(Isorhapontigenin)对心肌肥厚的抑制作用及其分子机制的研究[D];中国协和医科大学;2005年
5 周亚光;Ⅰ.丹参酮ⅡA对压力超负荷大鼠心肌肥厚信号转导系统MAPK通路的影响 Ⅱ.缺血后适应方法对脑的保护作用及其在复苏中的应用研究[D];华中科技大学;2010年
6 徐明;转录相关增强子-1在压力负荷心肌肥厚中的作用血管内皮生长因子B的关键作用[D];第四军医大学;2010年
7 王剑;利用条件基因剔除技术研究Smad4基因在心脏发育与疾病中的功能[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
8 章友华;肥厚心肌缺血再灌注损伤与心脏肾素[D];中国协和医科大学;1993年
9 屠恩远;丹参酮ⅡA对肥厚心肌信号转导系统蛋白激酶B通路的影响[D];华中科技大学;2009年
10 周亚光;1、丹参酮ⅡA对压力超负荷大鼠心肌肥厚信号转导系统MAPK通路的影响 2、缺血后适应方法对脑的保护作用及其在复苏中的应用研究[D];华中科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴建亮;心肌肥厚和TRP通道基因表达的研究[D];河北医科大学;2010年
2 解欣然;小檗碱抗心肌肥厚细胞模型的作用及机制研究[D];北京中医药大学;2007年
3 谢志翔;真武汤冲剂对压力负荷性心肌肥厚大鼠左心室重构的影响[D];广州医学院;2009年
4 张铖;吡格列酮和阿托伐他汀对压力负荷增加引起的大鼠心肌肥厚的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
5 孔令雷;内皮素受体拮抗剂的药效学评价及其在心肌肥厚中作用机制的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
6 谭凯;阿托伐他汀对压力负荷性心肌肥厚的保护作用及其机制的研究[D];青岛大学;2008年
7 孟艳;钙调神经磷酸酶抑制剂对压力超负荷性心肌肥厚、心衰小鼠左心室跨壁L-型钙电流的调节[D];河北医科大学;2011年
8 李亮;血管紧张素Ⅱ对心肌细胞K_v4.2钾通道蛋白表达的影响及其机制研究[D];河北医科大学;2006年
9 牛元坤;辛伐他汀对压力超负荷大鼠模型心肌肥厚的影响[D];青岛大学;2009年
10 阮杨;Akt/GSK3β信号通路在高血压心肌肥厚中的作用[D];大连医科大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王振岭;诱发心肌肥厚新基因被发现[N];健康报;2005年
2 本报记者  邱曙东;上海聚焦“科技小巨人”[N];解放日报;2006年
3 新讯;“胖病毒”可能是肥胖元凶[N];医药经济报;2007年
4 张建中;肥胖之因也许是病毒[N];健康报;2000年
5 徐铮奎;美国闹流感 全球打喷嚏[N];医药经济报;2008年
6 ;瑞士科学家发现病毒侵入细胞的过程[N];中国高新技术产业导报;2001年
7 ;伊贝沙坦和咪哒普利逆转自发性高血压大鼠心肌肥厚中细胞凋亡的变化[N];中国医药报;2003年
8 ;几种呼吸道病毒性疾病表现[N];中国医药报;2006年
9 庄北宁;神秘变异感冒病毒,在美夺10命[N];新华每日电讯;2007年
10 小文;默克公司艾滋病疫苗可能增加感染HIV风险[N];中国医药报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978