人促血液血管细胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）单克隆抗体的制备、鉴定及应用

【摘要】：人促血液血管细胞生成素(Hemangiopoietin，HAPO)是我实验室首次从再障病人尿中提取的一种新的蛋白因子。重组的HAPO具有明显的促进造血和放化疗保护作用。为了更好地进行HAPO的基础理论研究，我们通过杂交瘤方法制备了抗HAPO的单克隆抗体，组建了检测HAPO含量的ELISA试剂盒，并通过免疫印记对人血清及胎肝中的天然HAPO进行了初步鉴定。所筛选的单抗中，三株为IgG1，二株为IgM，其轻链均为κ。三株IgG1的相对亲和力分别为3.06×10~9M~(-1)，6.07×10~8M~(-1)和1.71×10~(10)M~(-1)，对抗原表位的识别均为构象非依赖性且均可用于冰冻及石蜡切片的免疫组化研究。血清及胎肝中天然HAPO的SDS-PAGE和western blot结果表明，二者中阳性带的位置均接近重组的HAPO。ELISA检测结果表明：正常成人血清中HAPO的含量为57.27±17.01ng／ml，重再患者血清中HAPO的含量为44.05±32.09ng／ml(P＜0.05)，慢再为79.32±55.67ng／ml(P＜0.01)，特发性血小板减少性紫癜为77.10±34.41ng／ml(P＜0.01)，淋巴细胞白血病为60.73±36.81ng／ml(P＞0.05)，非淋巴细胞白血病为69.30±40.87ng／ml(P＜0.01)，骨髓移植患者为42.85±30.00ng／ml(P＜0.05)，除淋巴细胞白血病外，均与正常水平有显著性差异。在非淋巴细胞白血病患者中，慢性髓细胞性白血病为65.97±35.20ng／ml，急性髓细胞性白血病为70.59±43.01ng／ml，其中M2为66.82±32.85ng／ml，M3为84.33±62.26ng／ml，M4为64.58±29.27ng／ml，M5为64.93±29.96ng／ml，