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骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗塞和在心血管疾病时生物学特性改变的研究

刘煜昊  
【摘要】:第一部分旨在证明人的骨髓间充质干细胞(MSC)分化为心血管组织的潜能。用5-氮胞杂苷诱导MSC向心肌细胞分化,用VEGF-B诱导向血管内皮细胞分化。异丙肾上腺素法制成NOD/SCID小鼠心肌损伤模型,经尾静脉注入标记的MSC。免疫荧光法检测MSC的体内外分化。结果显示,在体外,经诱导的MSC表达肌凝蛋白重链和肌钙蛋白Ⅰ,表达Ⅷ因子相关抗原和CD31。在体内,标记的MSC表达阳性的肌凝蛋白重链和Ⅷ因子相关抗原。以上结果说明MSC可分化为心肌和血管血管内皮细胞,是心血管再生医学的理想种子细胞。 第二部分研究猪的自体骨髓间充质干细胞(MSC)经冠脉内注射治疗急性心肌梗塞(AMI)的有效性和可行性。球囊阻塞法制成AMI模型。经冠脉注入经标记的MSC,4周后,核素心肌断层显像检测相对心梗面积、心肌灌注评分和射血分数,经导管检测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、压力升高最大速率(+dP/dt)和压力下降最大速率(-dP/dt)。免疫荧光法分析MSC的植入和分化。结果显示,和对照组相比,细胞治疗组射血分数显著增加[(44.1±4.3)%对(39.0±5.2)%,p<0.05],心肌灌注评分(30.0+5.3对41.8±8.8,p<0.01)和相对心梗面积[(28.6±4.7)%对(33.5±3.4)%,p<0.05]显著降低,LVSP(87.1+8.7mmHg对78.0+4.4 mmHg,p<0.05)、+dP/dt(1818.1±116.7mmHg/s对1610.64±114.5 mmHg/s,p<0.01)和-dP/dt(1800.9±88.5mmHg/s对1618.4+65.7mmHg/s,p<0.01)显著增加,LVEDP(9.4±1.7mmHg对12.6±2.8 mmHg,p<0.05)显著降低。标记的MSC在心肌中表达阳性的肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。因此,MSC在体内分化为心肌和血管组织,可改善AMI猪的心功能。 第三部分研究自发性高血压大鼠(SHR)间充质干细胞(MSC)生物学特性的改变。取SHR和WKY骨髓和主动脉的贴壁细胞,经CD105免疫磁珠分选,测定其生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测其免疫表型,进行纤维母细胞集落形成


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