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真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长及次生代谢产物的影响

陈晓梅  
【摘要】:铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.Ex Lindl是《中华人民共和国药典》收载的5种石斛属植物之一,是石斛属药用植物中最为珍稀名贵的种,有着极高的药用价值。近年来,由于过度采挖和生境的破坏,铁皮石斛的自然资源已濒临枯竭。而铁皮石斛独特的生理和生态学特点,又使其目前的人工栽培技术还不够成熟,难以实现大面积栽培。如何能够在保护铁皮石斛自然资源的前提下充分利用它为人类的健康保护事业作出贡献,成为目前一个急待解决的问题。 根据该植物与真菌形成菌根的特点,本论文对铁皮石斛原球茎与小菇属真菌MF24(Mycenasp.)诱导子的相互作用进行了系统研究;对MF24诱导子处理铁皮石斛原球茎、对照铁皮石斛原球茎、铁皮石斛原药材和金钗石斛原药材的化学成分进行了分析比较;对诱导子处理的铁皮石斛原球茎的次生代谢产物进行了研究:并以分离得到的铁皮石斛原球茎中的化学成分为标准,应用HPLC法分析了诱导子处理对原球茎中这些成分含量的影响,为解决铁皮石斛资源紧缺问题开辟新途径。 一、获得了真菌诱导子在铁皮石斛原球茎培养中的最佳工艺 首次以来源于铁皮石斛的小菇属内生真菌MF24(Mycena sp.)为诱导子,对铁皮石斛原球茎与诱导子在固体培养基上相互作用过程中诱导子的处理方法、使用剂量、加入时间及与原球茎作用时间等因素对原球茎生长及次生代谢产物的影响进行了系统研究,获得二者相互作用的最佳工艺为:以MF24菌麦麸液体培养基摇床发酵培养的发酵液为诱导子,以250mL·L~(-1)(诱导子·培养基~(-1))的剂量加入以1/2MS土豆固体培养基光照培养16周的铁皮石斛原球茎中,继续培养6周后收获。与单独培养的原球茎相比,在此条件下培养的原球茎鲜重提高了50%,干重提高了28%,总生物碱含量提高了12%。这一工作为今后铁皮石斛原球茎工业化生产奠定了基础。 二、应用HPLC-MS技术分析研究了石斛的化学成分 铁皮石斛和金钗石斛中生物碱类成分的相对积分面积和分别为6.04%和43.15%:共有的25个相同的化学成分,相对积分面积和分别为97.12%和50.09%;这些成分中铁皮石斛有23个成分的含量和相对含量高于金钗石斛。这些结果说明:铁皮石斛和金钗石斛在生物碱类成分的数量和含量上有很大差别,但就相同化学成分而言,铁皮石斛质量好于金钗石斛,这可能是传统认为的


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