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组织工程方法构建血管移植物的实验研究

汪黎明  
【摘要】:第一部分 组织工程血管种子细胞的培养 目的:为构建组织工程血管提供种子细胞。方法:全麻下取兔的主动脉,分别采用酶消化法和组织块贴壁法培养血管内皮细胞和平滑肌细胞,并传代、免疫组化鉴定及倒置显微镜下形态学观察。结果:成功地培养出血管内皮细胞和平滑肌细胞并传代。倒置显微镜下血管内皮细胞呈“鹅卵石”形态,平滑肌细胞呈典型的“峰-谷”状。免疫组化鉴定内皮细胞Ⅷ因子(+),平滑肌细胞α-肌动蛋白(+)。结论:所培养的血管内皮细胞和平滑肌细胞为研究组织工程血管提供了细胞来源。 第二部分 组织工程血管支架材料的制备和最适孔径的选择 目的:为构建组织工程血管提供支架材料并筛选最适孔径。方法:和清华大学化工系合作,用生物可降解材料聚β羟基丁酯(Poly-β-hydroxybutyrate,PHB)作为支架材料,运用流延成膜的方法制成实心和不同孔径的膜片;将培养的第3代血管平滑肌细胞种植于膜片上,于培养的第1、3、7、11、14天,采用倒置显微镜下观察、HE检查、甲苯胺蓝染色、扫描电镜检查及MTT法检测查明材料上细胞附着和生长情况。结果:成功地制备出PHB实心和不同孔径的膜片;倒置显微镜下无法观察附着于材料上的细胞,HE和扫描电镜标本制备过程中细胞丢失多,其不能为材料提高准确的信息,甲苯胺蓝染色可快速观察材料上细胞附着情况,MTT法可定量测定材料上的细胞数;经比较发现150~200um孔径的PHB膜片上血管平滑肌细胞附着和生长最佳。结论:150~200 um孔径的PHB膜片最适合血管平滑肌细胞的附着和生长;甲苯胺蓝染色和MTF比色法是观察细胞在材料上粘附和生长的较好方法。


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1 汪黎明;组织工程方法构建血管移植物的实验研究[D];中国协和医科大学;2004年
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