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严重急性呼吸综合征冠状病毒全基因组基因的克隆及SARS-Cov分子富集检测体系的研究

黑爱莲  
【摘要】:严重急性呼吸综合征(SARS)是由SARS冠状病毒引起的急性呼吸系统传染性疾病,该病传染性强,病死率高。SARS疫情波及全球30多个国家和地区,共有8000多人感染,900多人死亡。 SARS主要通过飞沫、密切接触等途径传播。由于其高度传染性,国家规定对SARS病毒标本的处理都必须在生物安全防护Ⅲ级(BSL-3或P3)的条件下由专业人员进行。这使得SARS研究的出发材料来源受到限制,从而阻挠了对SARS进行广泛、深入的科学研究。为解决该问题,同时也为了永久地保留这一前所未知的SARS冠状病毒的遗传物质,本研究首先进行了SARS冠状病毒(SARS-Cov)全基因组基因的克隆工作。SARS-Cov全基因组基因的克隆工作的原则是以国际基因库公布的SARS冠状病毒基因组序列为模板,将SARS-Cov基因组全长分为32个片段设计巢式RT-PCR扩增引物,并保证每相邻的两个片段相互重叠300~500bp,以从SARS GDH病毒株中提取的RNA为出发材料,对每个目的片段分别进行扩增、基因克隆及测序验证,结果表明,所得克隆可覆盖SARS基因组全长,其基因序列与GenBank公布的BJ01(AY278488)序列相比,一致率为99.9%。该克隆无传染性、可随时复制,为SARS的各项研究提供了广阔的研究平台。 由于SARS的高度传染性,对SARS患者及早诊断、及早隔离是阻断SARS传染链,防止SARS传播、蔓延的有效途径。WHO总结了全球科学家的研究成果,认为SARS的早期诊断主要依靠以


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