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克拉霉素对体外循环肺损伤保护作用的动物实验和相关基础研究

范祥明  
【摘要】:目的:中性粒细胞在炎症反应过程中起着重要的作用。衰老的中性粒细胞以凋亡的方式为巨噬细胞所识别并吞噬,这种细胞清除方式对炎症的控制和正常消散都有重要的意义。研究证实,多种大环内酯类抗菌素能影响中性粒细胞的功能,并诱导其凋亡。克拉霉素是新型14圆环大环内酯类抗菌素,其组织半衰期长,能在周围组织形成较高的药物浓度。本研究观察克拉霉素对体外中性粒细胞的凋亡诱导作用以及对中性粒细胞活性的影响。 方法:Percoll细胞分离液梯度密度离心分离得中性粒细胞,RPMI1640细胞培养基培养48小时,实验组加入不同浓度的克拉霉素(5、10、20 μg/ml)。台盼蓝染色,镜下观察细胞存活率。分别以流式细胞仪和原位末端标记法检测培养细胞的凋亡率。免疫组化法观察中性粒细胞凋亡相关基因蛋白Fas和bcl-2的表达情况。提取细胞培养液的上清,分别用比色法检测上清液中乳酸脱氢酶、髓过氧化物酶和活性氧的变化。 结果:克拉霉素明显缩短中性粒细胞的生存期,且浓度在10μg/ml以上时,其作用达到最大。克拉霉素组24小时中性粒细胞生存率为:5μg组为66.5±2.2%、10μg组为63.5±3.1%、20μg组为63.8±3.8%,明显低于对照组的80.2±3.1%(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示克拉霉素组24小时凋亡率为:1μg组为33.7±4.9%、5μg组为48±4.9%、10μg组为52±5.4%、20μg组为53±7.1%,明显高于对照组的31.5±3.5%(P<0.01)。原位末端标记法检测对照组中性粒细胞培养24小时的凋亡率为43.2±2.7%低于实验组的48.7±2.9%(P<0.01)。免疫组化染色结果显示实验组Fas的表达


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