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糖代谢细胞实验方法学及千金黄连丸加味方抗糖尿病作用及其机理研究

邹晨辉  
【摘要】:糖尿病目前已经成为全球患病率极高的疾病,其中2型糖尿病占患者总数的95%以上。随着生活水平的提高以及生活方式的改变,2型糖尿病发病率也在迅速增长,严重威胁着人们的身体健康和生活质量。2型糖尿病的一个重要特征是胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)。IR被认为是2型糖尿病、糖耐量异常(IGT)、肥胖、高血压、脂质代谢异常以及动脉粥样硬化等多种代谢相关疾病共同的病理生理基础。因此,深入研究IR发生发展的机理,寻求理想的胰岛素增敏药物已成为各国科研工作者关注的课题。 千金黄连丸加味改进方(FF-V)是本实验室在千金黄连丸加味(金芪降糖片方)的研究基础上提取各单味药的有效部位重新组成的,本文旨在验证其在动物模型上的整体药效作用以及分拆后的单一组分在细胞模型上的协同作用效果。 第一部分成功地建立了两种细胞水平上测定细胞摄取和代谢葡萄糖速率的快速检测方法。一种是基于2-NBDG荧光葡萄糖的细胞葡萄糖转运测定方法,另一种是结合细胞计数试剂盒CCK-8的细胞葡萄糖消耗量测定方法。它们都是非放射性的新方法,且适用于快速检测。一系列实验确定了生长快速,培养简便的Hep62细胞系作为检测对象;制定了合适的试剂工作浓度和作用时间;优化了细胞操作细则,以便合理安排工作时间及尽量减少中间步骤;选择了合适的样本数量、检测结果统计学处理方法;提出了实验方案的适用条件。将两种方法运用于实践,证明了其灵敏性和可重复性;发现了一些抗糖尿病药物在体外实验中的特殊现象,提出新的研究命题。 第二部分是FF-V在整体动物模型上药理药效总体的评价。新生ICR小鼠连续皮下注射MSG可诱发成年后的胰岛素抵抗。该模型具有明显肥胖,糖耐量异常、胰岛素耐量异常、高胰岛素血症以及糖异生增强等特征;脂质代谢明显异常,血清、肝脏和肌肉中甘油三酯水平升高;空腹血糖明显升高等等,是一种比较成


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