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马兜铃酸-DNA加合物合成及质谱分析方法研究

季文萱  
【摘要】: 研究目的 中药马兜铃酸(aristolochic acid,AA)被发现有致突变、致肿瘤性,研究认为其与马兜铃酸-DNA(aristolochic acid-DNA,AA-DNA)加合物有关。有必要建立简便快速准确检测AA-DNA加合物的方法,对进一步研究其生物化学特性和生物学行为有重要意义。 本研究拟体外合成并分别采用高效液相色谱-电喷雾线形离子阱串联质谱联用(HPLC-ESI/MS/MS)技术与傅里叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICRMS)鉴定AA-DNA加合物,分析研究其质谱行为,探讨该类化合物结构特征与质谱裂解行为之间的相关性,归纳与总结这类化合物的质谱裂解特征,最终建立简便快速准确检测AA-DNA加合物的质谱检测方法。 方法 AA经酶活化法或化学活化法活化后分别与脱氧腺苷酸或脱氧鸟苷酸反应生成AA-DNA加合物,优化并最终确立了合成反应条件。 应用液相色谱/质谱联用(LC/MS/MS)技术对合成的AA-DNA加合物进行结构鉴定,优化质谱检测模式及参数,详细分析加合物的质谱行为,在此基础上采用混合物直接进样的电喷雾-多级质谱(ESI-MS~n)与LC-MS~n等方法,进一步研究AA-DNA加合物在负离子模式的电喷雾电离条件下的质谱裂解特征。应用FT-ICRMS精确质量数测定和同位素模式检测进一步对合成的AA-DNA加合物进行鉴定。在此基础上建立质谱法检测AA-DNA加合物的方法。 结果 采用酶活化法或化学活化法分别成功合成脱氧腺苷-AAⅠ、脱氧腺苷-AAⅡ、脱氧鸟苷-AAⅠ和脱氧鸟苷-AAⅡ加合物,电喷雾线形离子阱质谱负离子采集模式下信号响应较好,测得其准分子离子峰分别为m/z621、m/z 591、m/z 637与m/z 607。ESI-MS/MS谱图提供了丰富的结构信息,且四种加合物LC/MS~n多级质谱裂解方式相似。FT-ICRMS负离子采集模式下分别获得加合物的精确质量数,提供的分子式与加合物分子式相符。同位素模式显示加合物同位素峰簇与相对丰度实测值分别与理论值相符。 结论 AA能在体外分别与脱氧腺苷、脱氧鸟苷形成AA-DNA加合物,质谱技术能提供丰富的有关加合物的结构信息。通过本项研究建立了快速方便准确分析与鉴定AA-DNA加合物的质谱分析方法。


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