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Sa抗原相关蛋白质的研究

陈华  
【摘要】: Sa抗原/抗Sa抗体系统是近十余年来发现的类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的血清学指标,对RA高度特异,并且和病情严重程度相关。对Sa抗原/抗Sa抗体系统的研究有助于推对其在临床的应用和阐明RA的发病机制。 本研究以阴离子交换层析法从新鲜人胎盘组织提取含有Sa抗原的人胎盘提取物(Human Placenta Extracts,HPE),用Sa阳性病人血清进行免疫印迹法检测抗Sa抗体为相对分子量50000(和)55000印迹阳性条带。对30例健康对照血清和6例各种风湿病标准血清的抗Sa抗体检测均阴性。检测155例各种风湿病患者血清(RA71例、强直性脊柱炎11例、银屑病关节炎7例、反应性关节炎7例、幼年特发性关节炎4例、骨性关节炎5例、风湿性多肌痛6例、痛风6例、系统性红斑狼疮7例、干燥综合征10例、炎性肌病8例、混合性结缔组织病4例、白塞病6例、成人Still病3例),抗Sa抗体对RA的诊断敏感性和特异性分别为47.9%和95.2%,阳性预测值和阴性预测值分别为89.5%和68.4%。 本研究以质谱研究Sa抗原的生化本质。切取抗Sa抗体阳性印迹条带对应的胶上条带,胰蛋白酶胶内酶解,高效液相色谱-电喷雾-离子阱串联质谱鉴定,SEQUEST程序检索NCBI NR数据库,鉴定出目标蛋白质为波形蛋白(Vimentin)。 为进一步确认目标蛋白质,本研究对人胎盘提取物进行双向电泳,免疫印迹法检测抗Sa抗体,得到Sa抗原的相对分子量(约50000)和等电点(约5.0)信息,与波形蛋白相符合。 本研究在大肠杆菌重组表达人波形蛋白,但免疫印迹法检测其抗体对RA的诊断敏感度低(36.6%),特异性差(83.3%),与抗Sa抗体的符合率低(Kappa=0.316),说明两者抗原性存在较大差异。 本研究继而对重组人波形蛋白进行了瓜氨酸化修饰,检测抗体发现其抗原性显著改变。抗瓜氨酸化波形蛋白抗体对诊断RA的敏感性和特异性分别为49.3%和86.9%,与抗Sa抗体的一致性较高(Kappa=0.746),提示人波形蛋白瓜氨酸化后形成新的抗原决定簇,与Sa抗原密切相关。但是抗瓜氨酸化波形蛋白抗体的假阳性率较高,特异性比抗Sa抗体差,对人波形蛋白与Sa抗原的关系仍有待进一步认识。 本研究也说明,质谱等蛋白质组学新技术应用于自身免疫病相关抗原的研究,必将推动对此领域的深入认识。


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