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食管鳞癌细胞系RRM1表达水平与细胞对吉西他滨敏感性的相关研究

罗扬  
【摘要】: 目的:对化疗药物原发或继发耐药是导致食箭癌化疗失败的主要因素,我们检测食管鳞癌细胞系对GEM的敏感性,重点探讨GEM在细胞内的作用靶点---RRM1表达水平对GEM疗效的影响,并进一步探索逆转耐药的方法。 材料与方法:我们培养4个食管鳞癌细胞系,包括Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706,采用细胞毒性试验结合蛋白印迹法和RT-PCR,初步分析各细胞系的RRM1表达水平与细胞对GEM敏感性的关系;使用50 nM GEM持续培养Kyse-450,监测在GEM筛选相对耐药细胞的过程中的RRM1表达水平的变化;采用RNAi降低RRM1表达水平后检测细胞对GEM敏感性的改变。统计学分析采用SPSS11.5,组间比较采用x~2检验,药物敏感性变化采用t检验。 结果:GEM主要作用于S期,与增加药物浓度相比,延长GEM的作用时间对凋亡的影响更为显著(P=0.014)。食管鳞癌细胞对GEM相对敏感,但各细胞系之间对GEM的敏感性相差较大,Eca-109、Kyse-150、Kyse-450和9706在GEM作用48小时的IC_(50)值分别为0.92mM、0.48mM、0.29mM和0.02mM,其中最耐药(Eca-109)和最敏感的细胞系(9706)之间的IC_(50)相差46倍;而各细胞系之间对DDP的敏感性相差较小(10倍),细胞对GEM或DDP的敏感性与该细胞的RRM1表达水平呈负相关;使用50nM的GEM持续培养Kyse-450,流式细胞仪检测结果显示随着GEM培养天数的增加,细胞凋亡比例逐渐增高,第0、3、7、10、13和16天凋亡细胞比例分别为1.57%、1.92%、2.95%、11.60%、16.30%和29.20%,同期存活细胞的RRM1蛋白水平也逐渐增高,第16天达到最高;RRM1 siRNA可以下调Kyse-450的RRM1表达水平,并且能够显著增加细胞对GEM的敏感性(P=0.035),转染RRM1 siRNA的细胞与母细胞系相比,其对GEM的敏感性增加了4.26倍。 结论:食管鳞癌细胞的RRM1表达水平可以预测细胞对GEM的敏感性,GEM可以诱导RRM1表达水平逐渐增高,针对RRM1的靶向治疗可用于逆转GEM耐药的研究。


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