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中性粒细胞及其FcγRIIA在部分血管炎病发病中作用的初步研究

杨竹生  
【摘要】: 血管炎是一种既有血管炎症,又有血管性损伤的临床病理过程。大量研究表明,大部分皮肤血管炎皮损是由免疫复合物沉积或Ⅲ型超敏反应引起,属于免疫复合物介导的血管炎,组织学改变表现为白细胞碎裂性血管炎。白细胞碎裂性血管炎的病理生理过程与实验性Arthus反应类似,需要免疫复合物沉积和中性粒细胞参与。 中性粒细胞表面存在多种免疫识别受体,其中IgGFc受体(FcγR)与含IgG的免疫复合物中的抗体Fc段结合,是连接固有免疫与获得性免疫的枢纽,在维持机体免疫及免疫耐受中起重要作用。近来的基因敲除试验表明,FcγR在引起免疫复合物介导的组织损伤,如实验性Arthus反应、血管炎中起关键作用。 第一部分聚集的IgG对白塞病中性粒细胞脱颗粒的影响以及FeγR在脱颗粒中的作用 白塞病是一种以血管炎为病理基础的反复发作与缓解的炎症性疾病。已有研究提示免疫复合物和中性粒细胞均与白塞病血管炎的发病有关,但其确切机制还不清楚。另一方面,中性粒细胞脱颗粒是介导炎症反应的重要方面。为了解聚集的IgG(aIgG,作为FcγR的刺激剂)对白塞病患者外周血中性粒细胞脱颗粒的影响,采用全血培养的中性粒细胞脱颗粒反应的体外研究体系,采集8例白塞病患者及8例正常人全血,以aIgG刺激作为处理因素,以加甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)及细胞松弛素B刺激为阳性对照,孵育2h,然后采用ELISA测定上清液弹性蛋白酶的释放水平;为了进一步了解FcγR在aIgG刺激白塞病患者外周血中性粒细胞脱颗粒中的作用,本研究利用FcγRⅡ和/或FcγRⅢ的单克隆抗体处理,以阻断FcγRⅡ和/或FcγRⅢ,然后进行上述类似实验。结果显示,白塞病患者外周血中性粒细胞对aIgG诱导的脱颗粒反应高于正常人(P0.05)。无论是白塞病患者还是正常人,阻断FcγRⅡ的单克隆抗体均可抑制aIgG诱导的中性粒细胞脱颗粒反应(P0.01),而阻断FcγRⅢ的单克隆抗体抑制aIgG诱导的脱颗粒作用不明显(P0.05)。加fMLP及细胞松弛素B刺激后,aIgG诱导的中性粒细胞的脱颗粒反应,白塞病患者和正常人均明显增加(P0.01)。本研究结果提示,白塞病患者外周血中性粒细胞受aIgG刺激引起的脱颗粒反应增强:外周血中性粒细胞脱颗粒主要通过FcγRⅢ介导。 第二部分白塞病中性粒细胞FcγRⅡmRNA的表达及其意义 在第一部分研究的基础上,进一步探讨了白塞病中性粒细胞FcγRⅡA在自塞病发病中的作用,了解白塞病患者外周血中性粒细胞FcyRⅡA mRNA表达,及其表达与中性粒细胞激活状况的关系。本研究采集25例白塞病患者活动期静脉血,以及其中15例患者经治疗和随访后的非活动期静脉血,分离中性粒细胞后,采用RT-PCR检测其FcyRⅡA mRNA的表达。采用分光光度法测定血浆血浆髓过氧化物酶活性(MPO,代表中性粒细胞激活)。均以正常人作对照。结果显示,白塞病患者外周血中性粒细胞FcγRⅡA mRNA的表达及血浆MPO活性,在活动期组高于非活动期组(P0.01),非活动期组与正常对照组比较无显著性差异(P0.05)。患者外周血中性粒细胞FcγRⅡA mRNA的表达水平与血浆MPO活性呈正相关(r=0.39l,P0.01)。本研究结果提示,白塞病活动期外周血中性粒细胞表达FcγRⅡA mRNA升高。推测中性粒细胞的FcγRⅡA可能与白塞病中性粒细胞的激活有关。 第三部分过敏性紫癜患者外周血中性粒细胞CD11b及血浆弹性蛋白酶的变化及其与疾病活动性的关系 过敏性紫癜是一种以中性粒细胞浸润为主的白细胞碎裂性血管炎。其确切的发病机理还不完全清楚,但目前已有研究发现,中性粒细胞可能参与其发病。本病多呈急性经过,但部分病例、尤其是肾脏受累者病程迁延且易反复。目前在对该病进行治疗及随访时,疾病活动性的判断多依靠临床症状,还缺乏能特异、准确反映疾病活动性的实验指标。本研究旨在探讨不同病期过敏性紫癜患者外周血中性粒细胞的活化指标,即细胞表面粘附分子CD11b的表达及血浆弹性蛋白酶活性的变化,及其与疾病活动性的关系。本研究采用流式细胞术检测12例过敏性紫癜患者活动期及其缓解期外周血中性粒细胞表面粘附分子CD11b表达的变化,并与12例健康人进行比较。采用酶联免疫吸附测定法检测20例过敏性紫癜患者活动期及其缓解期血浆弹性蛋白酶水平的变化,并与20例健康人进行比较。结果显示,活动期患者外周血中性粒细胞CD11b的表达及血浆弹性蛋白酶水平明显高于缓解期(P均小于0.01);缓解期患者外周血中性粒细胞CD11b的表达与健康人对照组比较,差异无显著性(P0.05);缓解期患者血浆弹性蛋白酶水平仍高于健康人对照组(P0.05)。在活动期,外周血中性粒细胞CD11b的表达及血浆弹性蛋白酶水平呈正相关(r=0.732、P=0.007):而缓解期两者无相关性(r=0.196、P=0.541)。本研究结果提示,过敏性紫癜患者外周血中性粒细胞处于激活状态,活动期较缓解期更明显。检测外周血中性粒细胞CD11b的表达及血浆弹性蛋白酶对了解疾病的活动性具有一定临床意义。


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