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猪苓菌核及发酵菌丝体化学成分研究及质量分析

周微微  
【摘要】: 猪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fries]系担子菌亚门层菌纲多孔菌科多孔菌属真菌,菌核入药,具有利尿、调节免疫功能、抗癌、保肝等多种生物活性。目前对于猪苓的成分研究,多侧重其多糖成分,本实验旨在通过系统化学分离手段,对猪苓菌核中所含的小分子类化合物进行深入研究,从另一方面揭示了猪苓药用功效的化学物质基础。 利用现代色谱技术和分离方法,对猪苓菌核的95%乙醇提取物进行了系统分离,共分离得到24个化合物,并通过现代波谱学技术(包括IR,~1H-NMR,~(13)C-NMR,HMQC,HMBC,NOESY,EI-MS,FAB-MS和HREIMS)鉴定了22个化合物。其中2个为新化合物.11个为首次从该真菌中分离得到。 新化合物为(20S,22R,24R)-16,22-环氧-3β,14α,23β,25-四羟基麦角甾-7-烯-6-酮(P-2),(23R,24R,25R)-23,26-环氧-3β,14α,21α,22α-四羟基麦角甾-7-烯-6-酮(P-4)。已知化合物包括7个甾体:麦角甾醇(P-1),22,23-环氧-3β,14α,20β,24β-四羟基麦角甾-7-烯-6-酮(P-3),猪苓酮B(P-5),猪苓酮A(P-6),麦角甾过氧化物(P-15),麦角甾-7,22-二烯-3-酮(P-16),麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇(P-17);1个三萜:木栓酮(P-12);2个蒽醌:大黄素甲醚(P-13),大黄酚(P-14);1个口山酮:2-乙酰基-1,3,8-三羟基口山酮(P-18);以及N-(2′-羟基二十四烷酰)-1,3,4-三羟基-2-十八鞘氨(P-7)、5-羟甲基糠醛(P-8),甘露醇(P-9),阿拉伯糖醇(P-10),α-羟基二十四烷酸乙酯(P-11),烟酸(P-19),尿嘧啶核苷(P-20),腺嘌吟核苷(P-21),尿嘧啶(P-23)。 利用多种吸附材料及分离方法首次对发酵猪苓菌丝体进行了系统的化学分离,共得到了15个化合物,鉴定了其中的12个,除化合物琥珀酸(MP-E-3)尚未在菌核中发现外,其余化合物都有见在菌核中存在,分别为麦角甾醇(MP-P-1),麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇(MP-P-2),麦角甾-7,22-二烯-3-酮(MP-P-3),α-羟基二十四烷酸乙酯(MP-P-4),猪苓酮B(MP-D-1),猪苓酮A(MP-D-2),N.(2′-羟基二十四烷酰)-1,3,4-三羟基-2-十八鞘氨(MP-D-3),腺嘌昤核苷(MP-E-1),烟酸(MP-E-2),尿嘧啶(MP-B-1),尿嘧啶核苷(MP-B-2)。 在对猪苓菌核化学成分系统研究的基础上,首次以5个甾酮为对照品,利用HPLC-DAD法建立了猪苓菌核中甾酮类成分的含量测定方法,从而为制定猪苓药材质量标准奠定了基础。色谱条件:Varian Polaris C_(18)-A色谱柱;流动相:乙腈-水(28:72);UV检测波长:247.4 nm;柱温:30℃;流速:1mL/mim进样量:20μL。结果表明,本实验方法稳定,准确可靠、重现性好。 建立了猪苓菌核的HPLC指纹图谱分析方法。采用HPLC法,在考察了分析方法和35批不同产地猪苓菌核样品的色谱图后,建立了猪苓菌核的指纹图谱。色谱条件:Varian Polaris C_(18)-A色谱柱;流动相:乙腈-水梯度洗脱:0~15 min:10:90~60:40:15~45 min:60:40~100:0;45~80 min:100:0~100:0。UV检测波长:247.4 nm;柱温:30℃;流速:1 mL/mim;进样量:20μL。结果表明,该方法稳定,重现性好,可以作为评价猪苓药材质量的指标之一。并应用所建立的指纹图谱条件,对猪苓人工培养材料进行了成分分析,发现在野生菌核21个色谱峰中,人工培养猪苓菌核有16个色谱峰与之对应,差异较小;发酵猪苓菌丝体与野生菌核有10个共有峰,但存在一定的差异。 综述了丝状真菌菌核的化学成分及生物活性研究进展。


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