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miR-181a的表达载体构建及其在胰腺癌细胞中抑制作用的初步探讨

徐楠  
【摘要】: 背景:胰腺癌是发病率高、预后差、死亡率高的恶性肿瘤,它发生转移早,手术切除困难,对放化疗不敏感。因此,寻找新的肿瘤标记和基因治疗方法有十分重要的意义。miRNA是一种长度为21—25bp的单链非编码RNA,不编码蛋白质,功能为负调控转录后水平的基因表达,进而调节细胞的代谢、增殖、分化和凋亡等过程。K-RAS是一原癌基因,在胰腺癌中90%以上的病例中有突变,已有证据表明在肺癌中受miRNA作用,如let-7。近年的研究发现胰腺癌中miRNA表达谱与慢性胰腺炎和正常胰腺中有很大差异,并确定了某些miRNA分子在胰腺癌中的靶基因和具体作用。 目标:构建重组MiR-181a载体,表达miR-181a,并进一步研究MiR-181a对胰腺癌细胞的生长、凋亡、迁移作用的影响及其对癌基因K-RAS的作用。 方法:1、以pcDNA4.0为载体骨架,用限制性内切酶和PCR方法构建pcDNA4.0-EGFP载体和pcDNA4.0-EGFP-MiR-181a载体,作为标记空载体和表达MiR-181a载体。 2、转染胰腺癌细胞系panc-1和mia paca-2,检测处理组和非处理组生长、凋亡、迁移情况和K-RAS蛋白的表达。 结果:1、转染重组MiR-181a载体后可降低panc-1细胞系中K-RAS蛋白表达; 2、转染重组MiR-181a载体减缓panc-1和mia paca-2细胞生长; 3、转染重组MiR-181a载体增加panc-1和mia paca-2细胞凋亡; 4、转染重组MiR-181a载体降低panc-1和mia paca-2细胞迁移能力; 结论:重组MiR-181a载体对胰腺癌细胞系有生长抑制、增加凋亡、减少迁移的作用,并降低癌基因K-RAS蛋白的表达。


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