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microRNA在PC12细胞CoCl_2诱导分化过程中的表达差异分析

何理  
【摘要】: MicroRNAs是一类长约22个核苷酸、进化上高度保守的内源性非编码RNA,通过转录后水平调节靶基因发挥作用。许多miRNAs(如miR—124,miR—9a)在神经细胞分化与增殖中起到了非常重要的作用。大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)具有神经嵴源性,使用CoCl_2诱导48小时后,可以产生神经突触样突起,因此PC12细胞常用作神经细胞分化的模型。本论文探讨了microRNA在PC12细胞COCl_2诱导分化过程中的作用。 首先,我们使用COCl_2诱导PC12细胞分化,建立了缺氧-神经分化的细胞模型。用150uM CoCl_2处理PC12细胞24h及48h后,缺氧诱导因子HIF-1α及HIF-1α下游基因VEGF表达升高,说明缺氧处理有效,并且在光镜下可见PC12细胞出现类神经元的分化。 然后,我们应用microarray芯片技术,检测PC12细胞CoCl_2诱导分化过程中348种大鼠miRNA的表达差异,结果提示COCl_2诱导24h后,22个miRNA表达上升,21个miRNA表达下调:CoCl_2诱导48h后,45个miRNA表达上升,30个miRNA表达下调。我们选定2个代表性的microRNA:miR27b(表达显著下调)和miR325-3p(表达显著上调)作为研究对象。并应用RT,Real Time PCR试验来验证miRNA27b和miR325-3p在PC12细胞CoCl_2诱导分化过程中的表达差异,结果发现miR27b表达水平持续下降,miR325-3p表达水平持续上升,与芯片结果一致。 在此基础上,应用脂质体向PC12细胞中转染合成的成熟miR27b,在转染后48小时,Real Time PCR实验结果提示转染后PC12细胞中miR27b含量明显高于未转染PC12细胞中miR27b的水平(15∶1),但转染miR27b对PC12细胞CoCl_2诱导分化过程并无明显影响。同时,通过脂质体转染方法向CoCl_2诱导的PC12细胞内导入外源性miR325-3p反义序列,我们发现细胞内miR325-3p反义序列的封闭作用对于COCl_2诱导PC12细胞分化过程亦没有明显的促进或抑制作用,从而推测miR27b和miR325-3p在此PC12细胞CoCl_2诱导分化过程中不起决定性作用。


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