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深低温停循环下兔脑血管内皮细胞紧密连接的早期变化与脑损伤的研究

黄海波  
【摘要】: 【目的】深低温停循环是心血管手术中一项重要的保障技术,在心血管外科中有广泛的应用。患者发生近期或远期不同程度的神经功能的障碍是深低温停循环后最突出的并发症。血脑屏障是机体维持中枢神经系统内环境稳定的重要结构,脑血管内皮细胞紧密连接行使着血脑屏障的主要功能。关于紧密联结的早期变化与深低温停循环后脑损伤的关系研究较少。本课题从脑血管内皮细胞紧密连接破坏的角度研究深低温停循环继发脑损伤的机制,观察血脑屏障超微结构变化,Occludin蛋白表达及细胞因子免疫细胞因子变化,明确深低温停循环后脑血管内皮细胞紧密连接的早期变化,探讨其机制及其在脑损伤中的作用。 【方法】建立兔体外循环(CPB)和深低温停循环(DHCA)模型,随机分为两组n=8,术后提取兔脑标本。采用~(125)I标记的牛血清白蛋白(~(125)I-BSA)作为示踪剂,评价血脑屏障通透性。利用透射电子显微镜给予超微结构损伤评分。用RT-PCR和Western Blot方法观察紧密连接蛋白Occuludin的MRNA和蛋白水平的变化。双抗夹心ELISA法检测实验组与对照组白介素-1及白介素-6水平变化;运用SPSS13.0软件进行相关统计学分析。 【结果】透射电镜发现两组脑细胞超微结构均明显损伤,DHCA组损伤重于CPB组(P<0.05);~(125)I-BSA放射性计数DHCA组高于CPB组(P<0.05);与CPB组相比,DHCA组家兔脑血管内皮细胞Occludin的mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.05):CPB组各时间点IL-1、IL-6水平无明显差异,DHCA组术后IL-1、IL6水平上调,与对照组有明显统计学意义P<0.05。 【结论】DHCA后脑细胞超微结构损伤比单纯CPB组更加严重,DHCA后血脑屏障通透性增高,且Occludin表达改变在血脑屏障破坏中起重要作用。Occludin表达水平能够代表BBB的结构状态,其下降程度可以作为BBB损伤程度的标志。细胞因子IL-1及IL-6水平升高,与紧密连接破坏有相关性。


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