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成人甲状旁腺细胞的培养鉴定及水凝胶化成人甲状旁腺细胞的形态和功能观察

赵越  
【摘要】:实验目的:探索成人甲状旁腺细胞提取和培养方法的可行性。为细胞移植治疗甲状旁腺功能低下提供理论依据。实验方法:采用胶原酶消化法消化成人甲状旁腺组织,使细胞离散,然后将细胞进行原代培养和传代培养,隔日观察细胞的形态和数量变化。消化所得细胞形态完整,经原代培养的细胞于2d时大部分细胞贴壁并展开,细胞形态呈梭形,细胞间形态差别不大,培养7d后细胞长满培养瓶瓶底。经传代培养的细胞1d细胞全部展开,细胞呈梭形,细胞体积比原代培养细胞大,7d后亦长满培养瓶底。消化传代培养的细胞,其中一部分通过电子显微镜观察细胞胞膜及胞质形态并检测留取培养液中甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)的含量,另一部分采用聚合酶链反应(PCR)的方法检测甲状旁腺细胞3种特异性标志物RNA:钙敏感性受体(calcium-sensing receptor,Ca SR)、PTH和GCM2(Glial cells missing-2)。实验结果:在电子显微镜下选取多处视野观察传代培养至第7d的细胞,镜下可见细胞胞质丰富,且胞质内含丰富的线粒体、内质网和高尔基体,胞质和细胞间均可见分泌囊泡;细胞培养液上清中可检测出PTH;甲状旁腺细胞特异性标志物PCR检测结果Ca SR、PTH、GCM2 RNA均呈阳性。实验结论:经胶原酶消化法消化成人甲状旁腺组织,提取甲状旁腺细胞并常规培养,所得甲状旁腺细胞具有良好的形态并保留正常的内分泌功能,并具有甲状旁腺细胞的特异表型,有成为永久性甲状旁腺功能减退症临床治疗时同种异体细胞移植来源的潜力。实验目的:探索水凝胶为载体包裹甲状旁腺细胞并应用于临床细胞移植治疗甲状旁腺减退症的可行性。实验方法:复苏冻存的成人甲状旁腺细胞并常规细胞培养,待细胞足量后,消化、离心、吹打得单细胞悬液,将壳聚糖溶液、交联剂、细胞悬液按比例混合制得水凝胶,加培养液后于37℃恒温箱中培养,隔日留取培养液上清检测甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)含量,并对凝胶内细胞染色观察细胞状态。实验结果:成功复苏并培养成人甲状旁腺细胞,细胞贴壁生长呈梭形;水凝胶成胶时间1min;荧光扫描结果显示24 h后胶内活细胞比例90%,连续观察3 d,比例没有发生明显改变;培养液中均检测到PTH。实验结论:水凝胶化的成人甲状旁腺细胞操作简单,甲状旁腺细胞被水凝胶包裹后,不仅能够维持细胞的正常形态,且能够稳定释放PTH,有成为细胞载体并应用于移植治疗甲状旁腺功能减退症的可能。


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