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补肾祛瘀前癌消对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响

李子文  
【摘要】:研究背景 前列腺癌是全球第五大常见癌症,亚洲地区是公认的前列腺癌低发地区。但是,随着生活条件的改善和诊断水平的不断提高,在我国,尤其是大城市,前列腺癌的发病率逐年升高。激素疗法是早期前列腺癌患者有效的治疗手段,可明显延缓前列腺癌进展、提高患者生存率。然而,大多数患者在经过中位时间12-18个月激素治疗后,几乎所有患者都进展为激素非依赖性前列腺癌,进入此阶段后,激素治疗失效,病情进展迅速,最终走向死亡。 中药治疗与现代治疗方法相比,副作用较小,作用层次和靶点多,越来越多地被应用于肿瘤疾病的治疗。本项目采用的补肾祛瘀中药复方拟称前癌消,是临床治疗前列腺癌的经验方。本实验室裸鼠体内研究结果提示,对于经过去势治疗的雄激素依赖性前列腺癌,该方有一定的增强去势疗效的作用,并可延缓去势后前列腺癌由雄激素依赖向雄激素非依赖转化;对于未经去势治疗的雄激素依赖性前列腺癌,该方有一定的促肿瘤生长作用,应该慎用。本实验选取前期体内实验所使用的也是研究中经常使用的雄激素敏感性LNCaP(?)田胞作为体外实验研究对象,以期通过本实验进一步研究前癌消对前列腺癌细胞的作用,为补肾祛瘀法在临床上治疗前列腺癌提供实验依据。 目的: 以人前列腺LNCaP细胞为研究模型,观察前癌消对该细胞的生物学行为产生的影响,从而为阐明其作用机制提供实验研究基础。 方法: 采用雄性Wistar大鼠双侧睾丸摘除术和前癌消水煎剂灌胃方法,获得4组不同的含药血清:正常对照组、单纯给药组、单纯去势组和去势给药组。用各组大鼠血清对人雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞实施干预,采用MTT法检测前癌消对LNCaP细胞增殖的影响;采用PI单染法和PI/Annexin V双染法结合流式细胞术,检测前癌消对LNCaP细胞周期和凋亡的影响;采用Hoechst 34580荧光染色观察LNCaP细胞凋亡的细胞核形态学改变;采用Fluo-4 AM荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察并测定延时钙离子荧光强度和瞬时钙离子荧光强度的变化;采用划痕法结合活细胞工作站长时间连续观察前癌消对LNCaP细胞迁移的影响。 结果 1、前癌消单纯给药组血清对LNCaP细胞增殖具有一定的促进作用。单纯去势组血清对LNCaP细胞增殖具有一定的抑制作用。去势给药组血清与单纯去势组血清相比,有轻度的促进细胞增殖的作用。 2、单纯去势组血清能够导致LNCaP细胞出现GO/G1期周期阻滞。去势给药组血清与单纯去势组血清相比,对LNCaP细胞周期的阻滞作用更明显。 3、单纯给药组血清、单纯去势组血清和去势给药组血清干预24和48小时后,都具有明显的促进LNCaP(?)田胞凋亡的作用,其中,单纯去势组血清促凋亡作用最强,去势给药组血清次之,单纯给药组血清最弱。激光共聚焦显微镜下可见相应作用时间和处理组出现典型的凋亡细胞核改变。 4、除正常对照组外,其他各组血清处理24小时后,LNCaP细胞胞浆中的钙离子荧光强度均有升高,其中,单纯去势组LNCaP细胞胞浆钙离子荧光强度最强,单纯给药组次之,去势给药组最弱。血清作用48小时后,去势给药组LNCaP细胞胞浆钙离子荧光强度最强,单纯去势组次之,单纯给药组最弱。 5、各组血清处理LNCaP(?)细胞,可见胞浆中瞬时钙离子的变化模式不同。除单纯去势组外,其他各组钙离子荧光强度均在观察期内开始降低。 6、去势给药组血清处理的LNCaP细胞在迁移实验研究的观察期内,迁移速度始终最快,其次是单纯去势组、单纯给药组,最慢的是正常对照组。但这种差异不具有统计学意义。 结论: 单纯使用前癌消含药血清,可轻度促进雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞增殖,但有一定的阻滞细胞周期和促进细胞凋亡的作用。单纯去势组血清,能够明显抑制LNCaP细胞增殖,导致细胞周期阻滞,并促进该细胞凋亡,促凋亡作用可能与细胞内钙离子超载有关。去势给药组血清的周期阻滞和促凋亡作用较单纯去势组血清更强,促凋亡作用可能与细胞内钙离子超载有关。单纯给药组、单纯去势组和去势给药组血清都能使LNCaP细胞迁移速度加快,但鉴于体外培养条件单一,无法模拟体内环境中其他因素的影响,故有待进一步研究。


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