中药对子宫内膜容受性影响的实验及临床研究

【摘要】：目的 1.在建立子宫内膜免疫微环境的基础上,研究紫丹饮对子宫内膜容受性相关标记物的影响,探讨紫丹饮改善子宫内膜容受性的分子机制。 2.运用病例自身对照研究方法,研究紫丹饮改善肾虚血瘀型月经过少患者子宫内膜容受性的作用。 方法 实验研究 1.采用孕4.5天小鼠子宫,通过酶消化及差速贴壁法分离子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞,利用原代细胞培养技术,建立体外子宫内膜细胞模型。并用免疫组化法进行细胞纯度鉴定。 2.采用孕12.5天小鼠子宫,通过免疫磁珠法分离子宫自然杀伤细胞(uNK),利用流式细胞仪测定细胞纯度,体外培养uNK细胞,并收集uNK细胞培养上清。 3.在建立体外子宫内膜细胞模型的基础上,将两种内膜细胞1：1混合并加入10%-90%不同浓度的uNK细胞培养上清培养24h、48h,选择合适浓度的uNK细胞培养上清建立子宫免疫微环境体系。 4.采取李仪奎法制备紫丹饮、阿司匹林含药血清及空白血清,以5个不同浓度(2.5%、5%、7.5%、10%、15%)分别作用子宫免疫微环境体系24h、48h、72h。以2.5%FBS DMEM-F12培养基组为对照,通过MTT检测紫丹饮含药血清对子宫免疫微环境体系中内膜细胞增殖的影响,选出药物作用的最佳浓度及时间。 5.以不同浓度含药血清培养液作用于子宫免疫微环境体系,并设立胎牛血清、空白血清、及阿斯匹林血清为对照,用Realtime-PCR(?)(?)检测紫丹饮对小鼠子宫内膜细胞LIF、整合素ανβ3、VEGF基因的表达的影响。 临床研究 运用病例自身对照研究的方法,采用月经失血图评估月经量,经阴道彩色多普勒超声评估子宫内膜容受性,对肾虚血瘀型月经过少并符合纳入标准的患者,予以紫丹饮治疗3个月经周期,通过对患者月经量、Salle评分、子宫内膜厚度、子宫内膜形态、子宫动脉血流参数、子宫内膜及内膜下血流状态等的评估及分析,观察紫丹饮对月经过少患者子宫内膜容受性的改善作用。 结果 1.在子宫内膜免疫微环境体系中,中药紫丹饮及阿司匹林含药血清均能显著提高子宫内膜细胞表达LIF、整合素αν β3及VEGF基因的表达,P0.05；其作用较阿司匹林显著,但不存在量效关系。 2.中药紫丹饮能显著提高患者的月经量(月经失血图评分,疗前19.49±8.63,疗后48.19±13.86,P0.001),促进患者子宫内膜厚度的增加(疗前7.5±2.6mm,疗后9.1±1.8mm, P0.001),改善患者内膜形态(疗前A+B型29例/43例；疗后A+B型42例/43例)、子宫血流灌注(疗前PI2.85±2.22；疗后1.81±0.78,P0.05)及子宫内膜血流局部血流灌注(疗前内膜血流存在3例；疗后内膜血流存在30例),超声综合评分Salle评分得到提高(疗前9.11±2.32；疗后16.14±2.70),使子宫内膜的容受性得到改善。 结论 1.子宫免疫微环境体系初步建立。 2.中药紫丹饮能显著提高子宫内膜免疫微环境中内膜细胞LIF、整合素αvβ3及VEGF的表达,其作用较阿司匹林显著,但不存在量效关系。紫丹饮改善子宫内膜容受性的作用可能通过上调内膜LIF、整合素αvβ3及VEGF的基因表达而起作用。 3.中药紫丹饮能显著提高月经量少患者的月经量,促进患者子宫内膜厚度的增加,改善患者内膜形态、子宫血流灌注及子宫内膜血流局部血流灌注,从而使子宫内膜的容受性得到改善。