收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

华蟾素注射液腹腔灌注干预结肠癌血性腹水中VEGF表达的机制研究

胡叶  
【摘要】:研究背景恶性腹水是由各种恶性肿瘤引起的腹水,多由肿瘤进展或转移引起。恶性腹水患者的平均生存期约为2-3个月,尤以胃肠道来源的最差,生存期不超过20周。肿瘤患者出现腹水,不仅会带来巨大的痛苦,更延误了积极的治疗机会,甚至引起营养匮乏、病情恶化,使生存期明显缩短。因此,如何有效减少恶性腹水,并减轻由此引起的相关临床症状,提高生存质量显得尤为重要。目前,现代医学的治疗手段主要包括利尿、腹腔穿刺引流、化疗、免疫治疗等。中医药因其副作用小、疗效好,在肿瘤治疗中越来越显示出其优势。华蟾素注射液作为干蟾皮的主要提取物,已广泛应用于临床中恶性腹水的治疗,具有较好的临床疗效,尤其对腹水局部辨证属于湿热毒证者疗效最佳。华蟾素注射液不仅能够有效缓解恶性腹水的发生、发展,同时能够使红色浑浊的腹水转澄清、降低腹水中红细胞数。其原因可能与华蟾素注射液能够抑制肿瘤新生血管形成相关。VEGF及其受体是促进血管生成的主要参与因子,在恶性腹水的形成和治疗方面发挥重要作用。因此,研究华蟾素注射液与结肠癌恶性腹水中VEGF及其受体之间的关系,对明确华蟾素注射液治疗结肠癌恶性腹水的机制、提高结肠癌恶性腹水的治疗疗效至关重要。基于上述内容,我们猜测华蟾素注射液能够抑制腹水中VEGF的表达,阻断VEGF与VEGFR-2的结合,减缓肿瘤新生血管形成,从而减少恶性腹水的产生。研究目的通过本研究,希望了解结肠癌血性腹水中,华蟾素注射液对VEGF、VEGF-mRNA和VEGFR-2等细胞信号通路的影响,明确华蟾素注射液对结肠癌腹膜转移肿瘤细胞信号通路VEGF表达的调节作用,初步阐述华蟾素注射液在治疗结肠癌腹水时的具体作用靶点和作用途径。研究方法本研究主要包括动物和细胞两部分实验,通过华蟾素注射液分别干预动物和细胞模型,从蛋白和基因层面揭示华蟾素注射液治疗结肠癌血性腹水时干预VEGF及其受体表达的情况,探索华蟾素注射液干预结肠癌血性腹水的可能机制。动物实验(华蟾素注射液干预荷瘤小鼠血性结肠癌腹水VEGF表达的研究)主要包括以下四部分内容:1、建立动物模型:我们尝试不同接种途径、不同细胞类型、不同接种剂量对小鼠的影响,建立符合课题需求的荷瘤小鼠血性腹水模型。2、华蟾素注射液剂量确定:我们设计并进行华蟾素注射液腹腔灌注的急性毒性试验,通过判断不同剂量干预后小鼠腹腔内各脏器的病理改变,明确华蟾素注射液的腹腔灌注安全剂量。3、荷瘤小鼠腹水量变化研究:药物干预后观察并记录各组小鼠腹水产生情况。4、荷瘤小鼠VEGF、VEGF-mRNA、VEGFR-2表达的影响:采用ELISA检测血性结肠癌腹水VEGF表达水平;WB检测小鼠肠系膜转移瘤VEGF、VEGFR-2含量;qPCR检测小鼠肠系膜转移瘤中VEGF-mRNA、VEGFR2-mRNA。细胞实验(华蟾素注射液干预人脐静脉内皮细胞代谢变化研究)主要包括以下两部分内容:1、华蟾素干预下HUVEC增殖变化:MTT检测HUVEC细胞凋亡情况;荧光显微镜观察用药前后细胞形态学变化。2、华蟾素干预下HUVEC中VEGF、VEGFR-2、VEGF-mRNA表达的影响:ELISA检测HUVEC细胞上清液中VEGF含量和细胞膜表面VEGFR-2含量;qPCR测定HUVEC细胞中 VEGF mRNA、VEGFR-2 mRNA 含量。研究结果1、结肠癌血性腹水的动物模型建立方法主要包括脾脏接种肿瘤细胞和腹腔接种肿瘤细胞两种。脾脏接种的方法更优于腹水的收集和计量,腹腔接种的方法则适用于与结肠癌腹水产生密切相关的肠、腹壁转移瘤的研究。2、华蟾素注射液腹腔灌注剂量不超过1ml时,不会引起小鼠肝、脾、肾脏器急性坏死,不会影响小鼠的体重、饮食等,属于安全剂量。3、华蟾素注射液呈浓度依赖性抑制荷瘤小鼠腹腔中腹水的含量。4、华蟾素注射液未降低脾脏组裸鼠血性腹水中VEGF表达量,各组腹水中VEGF含量无统计学意义(P0.05)。腹腔组BALB/c小鼠肠系膜转移瘤中VEGF与VEGFR-2表达量在不同浓度华蟾素作用下均呈现不同程度降低,由高到低的表达量分别为低剂量、中剂量、高剂量,该变化具有统计学意义(P0.05)。可见,华蟾素注射液呈浓度依赖性抑制小鼠肠系膜转移瘤中VEGF与VEGFR-2的表达。5、华蟾素注射液呈浓度依赖性降低腹腔组BALB/c小鼠腹腔转移瘤中VEGF-mRNA与VEGFR2-mRNA表达量,该变化具有统计学意义(P0.05)。其中,高剂量华蟾素注射液对两种mRNA的抑制作用最强,中剂量其次,低剂量抑制作用最弱。6、华蟾素注射液对HUVEC细胞有明显生长抑制作用,其抑制率在10-80%之间,半数抑制浓度(IC50)为1mg/ml,药物最佳作用时间为24h。24h内,华蟾素注射液对HUVEC干预呈“时间-浓度”依赖性。7、华蟾素注射液呈浓度依赖性抑制HUVEC细胞VEGF及VEGFR-2的表达,差异具有统计学意义(P0.05),其对VEGFR-2的抑制作用更高于相同剂量下对VEGF的作用(P0.001)。8、华蟾素注射液能够抑制HUVEC细胞VEGF-mRNA和VEGFR2-mRNA的表达,且该抑制作用呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P0.05)。研究结论我们成功建立荷瘤小鼠结肠癌血性腹水模型和人脐静脉内皮细胞模型。在动物和细胞实验中,我们均从基因和蛋白层面,明确了华蟾素注射液对VEGF及其受体的下调作用,同时发现华蟾素注射液虽对VEGF及其受体均有抑制作用,但对VEGFR-2的抑制尤其明显。进一步揭示了华蟾素注射液治疗结肠癌血性腹水的可能机制是下调VEGF及其受体,特别是降低VEGFR-2的表达,抑制肿瘤新生血管形成,从而为华蟾素注射液治疗结肠癌血性腹水提供了科学依据。本研究从分子层面证实华蟾素注射液对结肠癌血性腹水中信号通路VEGF表达的调节作用,为推广华蟾素注射液腹腔灌注应用于临床中治疗结肠癌血性腹水提供了实验依据,为华蟾素抗肿瘤的机制研究提供了新思路。未来研究将继续对华蟾素注射液抗肿瘤新生血管作用进一步验证并深入探究其分子机制。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 高波;吴旭;边宝林;;华蟾素注射液多肽成分分析和镇痛活性评价[J];中华中医药杂志;2018年07期
2 金京哲;;华蟾素注射液治疗晚期恶性肿瘤临床疗效观察[J];世界最新医学信息文摘;2016年58期
3 刘宏杰;束家和;钟薏;张彦博;刘慧;;华蟾素注射液减轻表柔比星心脏毒性的临床研究[J];中西医结合心脑血管病杂志;2014年06期
4 柳青;雷招宝;;华蟾素注射液的不良反应与合理用药[J];中成药;2012年07期
5 高元喜;温涛;邓李蓉;;华蟾素注射液、金葡素联合顺铂治疗老年肺癌胸水89例[J];当代医学;2012年24期
6 王盛菊;谢桂群;;华蟾素注射液治疗中晚期原发性肝癌60例疗效观察及护理[J];现代医药卫生;2011年18期
7 邱炳力;董桂兰;;华蟾素注射液治疗晚期恶性肿瘤60例临床分析[J];中国当代医药;2010年32期
8 陈静;段玉琴;张毅;;华蟾素注射液治疗老年晚期恶性肿瘤疗效观察[J];中国误诊学杂志;2009年31期
9 卢盛贞;于淑珍;;华蟾素注射液与化疗联合治疗消化道恶性肿瘤临床分析[J];中国当代医药;2009年09期
10 刘云霞,匡唐洪,蒋沈君;华蟾素注射液改善晚期癌症患者生活质量的临床观察[J];中国中医药科技;2005年01期
11 罗秋品,杨勤玲,王田桂,张汉利;华蟾素注射液与常用输液的配伍[J];中国医院药学杂志;1998年05期
12 罗秋品,王田桂,董卫华,杜明才;华蟾素注射液与12种药物在输液中的配伍实验[J];西北药学杂志;1996年06期
13 谢友好;华蟾素注射液对乙型肝炎病毒标志物临床转归的影响(附76例对比分析)[J];安徽中医学院学报;1995年03期
14 张皎玥;王凡立;周瑶;孟彤;刘影刚;;华蟾素注射液临床使用情况分析[J];中国冶金工业医学杂志;2017年06期
15 杨兴肖;马鸣;单保恩;李幼梅;宋姮;刘志坤;祝淑钗;;华蟾素注射液对人食管癌细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响及其机制[J];癌变·畸变·突变;2017年02期
16 蒋南;董禹洋;满莉;;华蟾素注射液治疗晚期消化系统恶性肿瘤患者的疗效观察[J];中国药物经济学;2017年10期
17 罗川;高波;边宝林;赵海誉;;华蟾素注射液治疗肺癌的系统评价[J];中国实验方剂学杂志;2016年08期
18 张文峰;郝立辉;;华蟾素注射液治疗原发性三叉神经痛的疗效观察[J];中国医院用药评价与分析;2010年12期
19 牛静秀;谢广茹;刘东颖;;华蟾素注射液治疗晚期消化系统恶性肿瘤30例疗效观察[J];天津中医药;2008年02期
20 郭好水;;华蟾素注射液的静脉刺激与防范[J];医药导报;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张凤瑞;宿桂霞;彭利;薄慕琴;;华蟾素注射液治疗晚期原发性肝癌的临床研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
2 陈;翟笑枫;万旭英;李瑾;凌昌全;;华蟾素注射液治疗中晚期原发性肝癌的临床观察[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
3 马国海;;华蟾素注射液治疗晚期恶性肿瘤35例近期疗效观察[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
4 孙韬;张誉华;左明焕;;华蟾素注射液外治法多途径治疗恶性肿瘤疗效观察[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育(2014)[C];2014年
5 张红;陈孟溪;曾柏荣;;华蟾素注射液治疗原发性肝癌TAE术后发热30例临床观察[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
6 贾立群;程志强;;华蟾素注射液在肿瘤临床应用特点与疗效[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
7 程建新;张军;宋俊芬;;华蟾素注射液治疗妇科恶性肿瘤的疗效观察[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
8 熊墨年;唐晓玲;张进;李慎勤;樊亚崑;;华蟾素注射液联合中药治疗老年晚期消化道肿瘤的临床观察[A];首届江西省科协学术年会江西省中医药学术发展论坛论文集[C];2010年
9 龙德;赵永心;卢慕舜;徐舒;赵燕;李菁;;华蟾素治疗中晚期原发性肝癌HBV-DNA高表达患者的近期疗效[A];发挥中医优势,注重转化医学——2013年全国中医肿瘤学术年会论文汇编[C];2013年
10 张培彤;;华蟾素注射液对106例恶性消化系统肿瘤的影响[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 胡叶;华蟾素注射液腹腔灌注干预结肠癌血性腹水中VEGF表达的机制研究[D];北京中医药大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 付海雁;华蟾素注射液对与淋巴管内皮细胞共培养下人肝癌HepG-2细胞的影响[D];大连医科大学;2012年
2 朱亚甲;恶性心包积液的中西医治疗现状及典型个案报道[D];北京中医药大学;2015年
3 汤伟;华蟾素注射液腹腔灌注治疗恶性腹水及其VEGF表达的临床研究[D];北京中医药大学;2017年
4 薛艳红;注射用华蟾素工艺、质量研究及药效学研究[D];吉林大学;2007年
5 刘歆;华蟾素注射液局部注射联合化疗治疗恶性体表转移瘤10例临床分析[D];山东中医药大学;2015年
6 陈秀英;华蟾素注射液对人淋巴内皮细胞增殖、迁移和管状结构形成的影响[D];大连医科大学;2012年
7 刘俊秋;华蟾素注射液亲脂性成分及其肝微粒体代谢产物研究[D];中国中医科学院;2014年
8 郑艳花;重组人血管内皮抑素联合奥沙利铂或华蟾素抗肝癌血管生成的实验研究[D];南京中医药大学;2012年
9 王双双;华蟾素注射液寒热药性研究[D];第二军医大学;2008年
10 李娟;华蟾素注射液腹腔灌注治疗湿热型恶性腹水的临床研究[D];北京中医药大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 付德明;华蟾素注射液的不良反应[N];中国医药报;2004年
2 海问;海南降低华蟾素注射液等32种中成药肿瘤用药零售价格[N];医药经济报;2006年
3 夏金彪;药价每两年微调一次[N];中华新闻报;2006年
4 夏金彪;药品价格进入微调时代[N];经理日报;2006年
5 本报记者  夏金彪;药品大降价即将结束 药价进入微调时代[N];中国经济时报;2006年
6 赖强;调价令的宿命[N];医药经济报;2006年
7 本报记者 陈国东;32种抗肿瘤中药降价[N];医药经济报;2006年
8 王亚煌;华蟾素抗癌作用机制研究获突破[N];中国医药报;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978