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化痰祛湿方预防大鼠肥胖型少弱精子症及其氧化应激机制研究

董阳  
【摘要】:男性不育的发病率逐年上升,其主要发病类型为少弱精子症。现代医学认为少弱精子症的发生与环境、内分泌、免疫、感染、精索静脉曲张等因素有密切联系。近年来研究发现,肥胖也是导致少弱精子症的原因之一。肥胖在中医体质分类中多属痰湿体质。王琦教授提出少弱精子症核心病机为“肾虚夹湿热瘀毒虫”,而肥胖之人多食肥甘厚味,伤及脾胃,脾胃运化失调,聚湿生痰,痰湿郁久则化热,与“湿”“热”病机相符。因此,根据体病相关论以及治未病的思想,本课题建立肥胖少弱精子症大鼠模型,预防性给予化痰祛湿方,观察该方对高脂引起的肥胖少弱精子症大鼠脂代谢及精子参数的调节作用,并探究其可能的机制。目的:通过动物实验,建立肥胖型少弱精子症大鼠模型,预防性给予化痰祛湿方(HTQSD),观察该方对高脂饮食引起的肥胖型少弱精子症大鼠脂代谢及精子参数的调节作用,并探究其可能的机制。方法:8周龄Wister雄性大鼠,按照体重随机区组法分为空白组、模型组、五子衍宗丸(WZYZP)组、化痰祛湿方(HTQSD)低、中、高剂量组,每组24只。空白组给予普通饲料,其余各组大鼠给予高脂饲料喂养12周。空白组及模型组灌胃相同体积生理盐水,WZYZP组给予五子衍宗丸(1.07g/kg),其余各组给予化痰祛湿方低、中、高剂量(6.56g/kg、13.13g/kg、26.25g/kg),灌胃体积均为1ml/100g。在实验一中称量大鼠体重,取心脏组织、肝脏组织、睾丸组织,称量后计算相应脏器指数。使用扩散法收集附睾尾精子,使用血细胞计数板进行精子质量分析。在实验二中采用ELISA检测大鼠血清脂代谢及性激素水平。在实验三中将大鼠睾丸进行HE染色,利用光学显微镜进行组织形态学观察,观察内容主要为睾丸生精小管内生精细胞的病变情况,并记录Johnsen评分。在实验四中,分别采用RT-PCR与Western Blot检测血清SOD1与HO-1的mRNA和蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠第8周体重、Lee’s指数、肝脏指数显著增加(P0.01,P0.001),精液浓度和精子活动率(P0.01,P0.001),血清TG、TC、LDLC水平显著升高(P0.001),HDL-C水平显著下降(P0.001),T、E2、LSH水平显著降低(P0.01,P0.001),Johnsen评分降低(P0.05),SOD1(超氧化物歧化酶)与HO-1(血红素加氧酶-1)的mRNA和蛋白表达均显著降低(P0.001);至第12周末,以上指标差异依然存在,且出现睾丸指数下降(P0.05)。在实验一中,与模型组相比,HTQSD低、中、高各剂量组体重、Lee’s指数均出现显著下降(P0.01,P0.001),精子活动率显著上升(P0.01,P0.001),WZYZP与HTQSD中剂量组精液浓度上升明显(P0.01,P0.001);在实验二中,HTQSD中剂量组第4周TG、TC、HDL-C、LDL-C与T、LSH指标水平出现差异(P0.01,P0.001),WZYZP组TG水平第8周才显著下降(P0.01),TC、HDL-C、LDL-C指标变化不明显(P0.05),T、FSH水平在第4周升高并持续至12周(P0.001),E2水平第12周出现明显上升(P0.01)。在实验三中,与模型组相比,WZYZP组与HTQSD中剂量组大鼠Johnsen评分从第8周开始出现差异(P0.01,P0.001)。在实验四中,HTQSD在12周能显著升高大鼠血清SOD1 mRNA表达(P0.01),而WZYZP并无明显作用。从第8周开始,中剂量HTQSD可提高HO-1的mRNA表达水平(P0.01),且持续至12周(P0.001),WZYZP至12周才出现与模型组的差异(P0.05)。结论:化痰祛湿方可以预防性调节大鼠的血脂,并且其可能通过改善血清中相关的抗氧化物,减轻氧化应激程度,改善少弱精子症大鼠精液质量。


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