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类风湿关节炎"证"的演变规律及养血活血方部分作用机理的实验研究

于静  
【摘要】: 类风湿性关节炎(RA)是一种难治性自身免疫性疾病,至今病因未明,西医对其治疗存在许多问题,中医药治疗此病具有潜在的优势,养血活血法治疗此病有着浓厚的理论基础及广泛的临床验证,但缺乏现代数字化的解释,这是中医药真正走向世界所急待解决的问题。越来越多的研究表明,细胞免疫及细胞凋亡在RA的发病机理中占有重要地位,可能与RA血虚血瘀证存在一定关系,且参与养血活血方治疗RA的作用机理。 1目的 通过对不同病期给药大鼠疗效观察,以药测证,研究“血虚血瘀证”在佐剂性关节炎(AA)大鼠中的可能存在规律;通过养血活血法对AA大鼠血小板聚集状态、细胞免疫、细胞凋亡方面的影响,探讨养血活血法治疗RA的部分现代机制。 2方法 2.1理论方法:通过文献学研究及导师的临床经验总结,对RA血虚血瘀证存在的可能性进行调查、总结、分析。 2.2实验方法:以弗氐完全佐剂(CFA)诱导的Wistar雄性大鼠佐剂性关节炎(AA)为研究对象,将其随机分为正常组(A)、模型组(B)、痹通去养血药治疗组(C)、地塞米松治疗组(D)、痹通大剂量治疗组(E)、痹通中剂量治疗组(F)、痹通小剂量治疗组(G)、痹通中期治疗组(H)、痹通晚期治疗组(I)。以采用和血法为组方原则的痹通进行干预,以痹通去养血药的复方及地塞米松为治疗对照。对各组动物分别进行如下检测:(1)CFA免疫前及免疫后每隔二日的关节容积,每周一次的体重。(2)CFA免疫后30天、45天、60天血中的ESR、CRP、RF的水平和踝关节及滑膜组织的病理形态学改变。(3)于CFA免疫后30天、45天、60天用酶联免疫斑点法(ELISA)检测血中的TXB2及6-酮-PGF1α水平,并与ESR、CRP、RF进行相关分析。(4)CFA免疫后30天、45天、60天ELISA法检测血中的IFN-γ、IL-4水平,并将其比值与TXB2及6-酮-PGF1α进行相关分析。(5)CFA免疫后30天、45天、60天免疫组化法检测滑膜中的Fas、FasL、Bcl-2表达情况。 3结果 3.1 AA的体征与可能存在的证的分析 与正常组相比,AA大鼠于给药后出现关节速发型和迟发型超敏反应,于造模后第1及16天有两个肿胀高峰。以踝关节为著(P0.01),体重未减轻。E、F、G组于造模后第7天始,能明显抑制关节局部的肿胀,与B组比较,具有显著性差异(P0.05),且有明显的量效关系。与C组比较,改善程度更大,差异具有显著性(P0.01)。H组于给药后16天,与F组比较,改善幅度相当(P0.05),与I组比较,改善程度较大,差异具有显著性意义(P0.01)。提示痹通作用较其去养血药佳,早、中期治疗优于晚期治疗。 3.2 AA病情、病理与血虚血瘀状态的可能微观指标研究 “病在血络,血虚血滞”是RA的主要病机,有其赖以依存的微观基础,可能部分表现在:ESR增快,CRP升高,RF升高(P0.01)。与C组比较,E、F组显著降低了这三个反映 WP=6 病情的指标(P0.01);H、I组作用与G组相当(P0.05)。镜下可见:B组的滑膜层明显增多,滑膜细胞增生,小血管增多,血管翳形成,可见大量淋巴细胞浸润。C组可见滑膜细胞轻度增生,细胞层略增多。E、F、H组均未见明显异常,I组可见滑膜细胞明显增生,大量淋巴细胞浸润。 3.3血虚血瘀状态与病情、细胞免疫、细胞凋亡的部分相关性研究 AA大鼠血中TXB2浓度明显升高、6-Keto-PGF1α浓度明显降低(P0.01),与C组比较,E、F组均可明显改善这种状态(P0.05),H组及I组疗效不及F组,差异具有显著性意义(P0.05),I组疗效不及H组,差异具有显著性意义(P0.05)。模型组大鼠TXB2 、6-酮-PGF1α与ESR、CRP之间的相关性较大,TXB2分别与ESR、CRP呈正相关(P0.01), 6-酮-PGF1α分别与ESR、CRP呈负相关(P0.01)。TXB2 、6-酮-PGF1α与RF无相关性(P0.05)。E、F、G、H、I组均可改善AA大鼠IL-4降低及IFN-γ升高的状态(P0.01), F、H组作用均优于C组(P0.05),H组作用较F组差(P0.05),I组作用较H组差(P0.05)。未发现TXB2、6-Keto-PGF1α与IL-4及IFN-γ之间存在相关关系(P0.05)。痹通可明显增加AA大鼠踝关节滑膜细胞促进凋亡的Fas、FasL基因蛋白的表达,降低Bcl-2的表达,与B组比较,差异具有显著性(P0.05),与C组比较,E、F组疗效较佳,差异具有显著性意义(P0.05);与I组比较,F及H组作用明显,差异具有显著性意义(P0.05)。 4结论 4.1以养血活血法为组方原则的中药复方疗效优于其去养血药的中药复方,且不具有降低体重的副作用。 4.2在三个模拟病期中,以早期疗效最佳,中期次之,晚期最差。 4.3痹通治疗组存在明显的量效关系,大剂量疗效最好,中剂量次之,小剂量最差。 4.4血虚血瘀证存在于RA的可能性大于单纯血瘀证,且主要存在于早期和中期,晚期以其它证型为主。


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