收藏本站
收藏 | 论文排版

重肌灵片抗重症肌无力作用机理研究

王静  
【摘要】:重症肌无力(Myasthenia Gravis, MG)是人类的一种由针对神经肌肉接头突 触后膜上乙酰胆碱受体(Acetylcholine Receptor,N2-AChR)的自身抗体介导的 器官特异自身免疫疾病,临床主要特征是随意肌进行性虚弱无。实验性自身免疫 性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis,EAMG)是用从电 鳐电器官提取的乙酰胆碱受体加完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant, CFA)免疫敏感动物后制成的人类重症肌无力模型。MG 体内 N2-AchRab 的产生主要 依赖于 Th 细胞及其分泌的细胞因子的调控,Th1细胞因子 IFN-γ、IL-2 以及 Th2 细胞因子 IL-4、IL-10 与 MG 和 EAMG 发生发展相关。Th3细胞因子 TGF-β则对这 种疾病有抑制作用。 重肌灵片为河北以岭医药研究院临床长期用于治疗重症肌无力的中药复方, 其主要组成为黄芪、人参、鹿茸、制马钱子等,具有温理奇阳,扶元振颓作用, 临床治疗千余例肌无力患者,效果明显。药效学研究提示重肌灵片具有免疫调节 作用。为探讨重肌灵片免疫调节作用的机理,我们用纯化的 N2-AchR 作为抗原免 疫 Lewis 大鼠,展开了以细胞因子尤其是 IFN-γ为中心相关研究。 本课题分四部分进行: 1. 重肌灵片治疗给药对 EAMG 大鼠的主要药理作用 我们用从电鳐电器官提取的含 N2-AchR 粗提液加完全弗氏佐剂免疫 150-180g Lewis 大鼠制成 EAMG, 动物于首次免疫后的第 25 天开始给药,对 EAMG 大鼠的临 床症状、肌力、运动能力、肌电图、血清中抗 N2-AchRab、突触后膜 N2-AchR 的数 目以及细胞免疫功能等指标进行观察。结果发现重肌灵片可以改善 EAMG 模型大鼠 的临床症状,提高 EAMG 模型大鼠体重、肌力和运动能力,抑制 EAMG 模型大鼠血 清中抗 N2-AchRab,降低 EAMG 模型大鼠连续低频电刺激后出现的肌肉收缩幅度的 衰减,提高 EAMG 模型大鼠突触后膜 N2-AchR 数目。抑制 EAMG 模型大鼠体内 N2-AchR 诱导的特异性细胞免疫反应,对 ConA 诱导的细胞免疫反应有增强作用(P0.01 或 P0.05)。重肌灵药理作用不同于西药的免疫抑制剂,具有选择性免疫调节作 用,即下调针对 N2-AchR 特异性病理免疫性反应,对正常免疫功能不抑制反而有 增强作用。 2. 重肌灵对正常小鼠和免疫抑制小鼠免疫功能的影响 我们选用 18-22g C57BL/6j 雌性小鼠,灌胃给药 10 日后发现,重肌灵大、中 剂量组对正常小鼠脾脏、胸腺重量无明显影响。重肌灵大剂量能明显增强 ConA 和 LPS 诱导的小鼠脾 T、B 淋巴细胞增殖和 IL-2 的分泌; 选用 18-22g C57BL/6j雌性小鼠环磷酰胺隔日腹腔注射,给药剂量为 80mg/Kg, 共三次,制备免疫抑制模型结果发现重肌灵能显著提高免疫抑制小鼠胸腺及脾脏 WP=5 2 重肌灵片抗重症肌无力作用机理研究 指数,增强 ConA、LPS 诱导的 T、B 细胞增殖,提高 IL-2 的分泌量,且有明显的 量效关系。说明重肌灵具有免疫增强剂特性。 3. N2-AchR 的纯化和建立纯化 N2-AchR 诱导的 EAMG 模型 我们将含 N2-AchR 的 TritonX-100 粗提液用α-眼镜蛇毒偶联的琼脂糖亲和层 析柱进一步纯化,纯化的 N2-AchR 经过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳呈 4 个条带,其 分子量分别为 40,000、43,000、53,000、62,000。这可能是受体的四个亚基。采 用考马斯亮兰 G250法测定纯化 N2-AchR的蛋白量为 116.6mg/5.2公斤电鳐湿器官。 我们参考国外文献,以 150 ug 国产电鳐纯化的 N2-AchR,每隔 10 天免疫 Lewis 大鼠,共三次,成功诱导 EAMG 模型。纯化 N2-AchR 诱导的 EAMG 模型发病早、病 情重、模型发生率高(70%)。 4. 重肌灵片对纯化 N2-AchR 诱导的 EAMG 大鼠免疫调节机制的研究 采用双抗体夹心 ABC-ELISA 和 RT-PCR 法对纯化 N2-AChR 诱导的 EAMG 大鼠体 内 IFN-γ、IL-4、 TGF-β的含量和 mRNA 转录水平进行检测。研究发现重肌灵片 通过上调 EAMG 大鼠体内内源性抑制因子 TGF-βmRNA 的转录来增加 TGF-β蛋白合 成,大量分泌的 TGF-β作用于 IFN-γ、IL-4 从而抑制后两种因子的异常增高。 结果导致抗 N2-AchRab 滴度下降,达到抗肌无力作用。 采用硝酸还原酶法和化学比色法检测纯化 N2-AChR 诱导的 EAMG 大鼠体内 NO 和 NOS 的含量。结果发现重肌灵片能抑制病理性 NOS 和 NO 产生,减轻其对肌肉神 经组织的损伤。 将纯化N2-AChR诱导的EAMG大鼠 窝、腹股沟淋巴结细胞体外培养,用N2-AchR 刺激 24 小时后,上流式细胞仪检测不同亚群特异性 T 细胞的凋亡率。研究发现重 肌灵片能显著提高特异性 CD4+T 细胞的凋亡,恢复 EAMG 体内淋巴细胞的自稳状态, 达到抗肌无力的目的。重肌灵片这种促进自身反应性 T 细胞凋亡的作用,不能被 IFN-γ逆转。 综合以上研究结果表明,EAMG 体内存在 IFN-γ、IL-4 表达异常增多现象, 二者作用于 B 细胞刺激其合成大量抗 AchRIgG1 和 IgG2,这种自身抗体作用于 NMJ 处的乙酰胆碱受体,致使神经肌肉传导障碍从而诱发肌无力症状的产生。重肌灵 具有免疫调节作用:通过上调 EAMG 体内内源性抑制因子 TGF-βmRNA 转录来增加 TGF-β蛋白合成,大量分泌的 TGF-β下调异常增多致病因子---IFN-γ、IL-4, 结果 EAMG 大鼠体


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 韩涛,周勇,王旭丹,葛东宇,王静,吴以岭,田书彦,高学东,李萍;重肌灵对EAMG大鼠免疫调节作用的实验研究[J];北京中医药大学学报;2003年03期
2 王旭丹,周勇,韩涛,葛东宇,王静,吴以岭,田书彦,高学东,李萍;重肌灵片对实验性重症肌无力的影响[J];上海免疫学杂志;2003年05期
3 韩涛,周勇,王旭丹,葛东宇;重肌灵对EAMG大鼠血清IL-4、IFN-γ水平的影响[J];中国实验方剂学杂志;2003年02期
4 王静,周勇,王旭丹,韩涛,葛东宇;中药重肌灵片体内对EAMG大鼠IFN-γ、IL-4、TGF-β水平的影响[J];中国免疫学杂志;2004年01期
5 张志慧,韩涛;重肌灵对大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能以及IL-1诱生的影响[J];中医药学刊;2003年07期
6 许凤全,陈金亮,平阳,周顺林,黄涛,赵振军;重肌灵片治疗ⅡA型重症肌无力的临床研究[J];北京中医药大学学报(中医临床版);2004年04期
7 谢琰臣;细胞因子在实验性自身免疫性重症肌无力发生机制中的作用(综述)[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2002年02期
8 王静,周勇,郭倩,王旭丹,韩涛,葛东宇,吴以岭,田书彦,高学东;重肌灵片对EAMG大鼠体内NO和NOS的影响[J];北京中医药大学学报;2004年02期
9 李婉宜,李明远,陈平,龚其美,李虹,肖丽英;AchR或ConA诱导正常人淋巴细胞培养上清治疗EAMG的研究[J];上海免疫学杂志;2001年06期
10 许凤全,陈金亮,胡军勇,周峻伟;重肌灵系列制剂治疗重症肌无力300例[J];中国中医药科技;2001年05期
11 王小莹,高秀梅;中药治疗重症肌无力的免疫学机理的研究进展[J];中药新药与临床药理;2004年05期
12 周红;重症肌无力与细胞因子[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1999年01期
13 王云甫,孙圣刚,陈吉相,曹学兵,何国厚;转化生长因子-β1基因修饰的树突状细胞对重症肌无力大鼠发病的干预[J];中华神经科杂志;2005年03期
14 吴相春,吴相锋,李峥,来静;中西医结合治疗重症肌无力胸腺切除术后复发60例临床观察[J];河北中医药学报;2001年03期
15 梁丽云,丰玲,马存根;诱导EAMG耐受性机制初探[J];大同医学专科学校学报;2000年01期
16 刘萍,张静生;黄芪复方对EAMG大鼠血清IL-4、IFN-γ、TGF-β水平的影响研究[J];中医药学刊;2004年09期
17 付锦,王化冰,杨伊姝,王维治;一氧化氮合酶抑制剂对实验性自身免疫性重症肌无力的作用[J];中华神经科杂志;2004年06期
18 付锦,王化冰,王维治;一氧化氮供体对自身免疫性重症肌无力大鼠的作用[J];中华医学杂志;2004年19期
19 梁丽云,马存根,丰玲;IFN-γ、IL-4、TGF-β在诱导EAMG耐受中的作用[J];免疫学杂志;2000年04期
20 富羽弘,王化冰,王丽华,王维治;设计耐受原并用鼻黏膜耐受治疗EAMG的方法学研究[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘莹;池木根;王玉霞;;实验性重症肌无力(EAMG)动物模型的研究[A];中国药理学会第十届全国神经学术会议暨浙江省药理学会2002年年会论文摘要集[C];2002年
2 杨欢;胡珏;;CathepsinS(组织蛋白S)参与EAMG发病机制[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
3 付锦;王化冰;王维治;;一氧化氮合酶抑制剂对EAMG的作用研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
4 蒋方建;臧海生;徐冬波;陈钢;谭金兴;;“强力方”治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的机理研究[A];第七次全国中西医结合虚证与老年病学术会议论文摘要集[C];2003年
5 贾维刚;;EAMG大鼠血清AchR-Ab及TGF-β1变化的意义及用肌力康饮对其治疗的影响[A];第十次中国中西医结合微循环学术会议论文集[C];2010年
6 孙圣刚;王云甫;陈吉相;曹学兵;胡芳;;TGF-β1基因修饰的树突状细胞对重症肌无力病情的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
7 赵吉成;闫彬彬;杨硕;徐欣;乔慧;李呼伦;;NK1.1+细胞在实验性重症肌无力发病中的作用[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
8 肖波;杨欢;;HLA转基因小鼠重症肌无力模型人类乙酰胆碱受体相关T细胞抗原表位的研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
9 曹学兵;王云甫;刘昌勤;胡芳;;喹诺酮类抗生素致重症肌无力加重反应机制的实验研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
10 王桂平;李柱一;刘睿;王者晋;;实验性自身免疫性重症肌无力被动免疫模型的建立与评测[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 韩涛;重肌灵抗重症肌无力的主要药理作用及作用机制的研究[D];北京中医药大学;2003年
2 王静;重肌灵片抗重症肌无力作用机理研究[D];北京中医药大学;2004年
3 王玉忠;scFvCD20负载antagomiR155治疗EAMG的实验研究[D];中南大学;2012年
4 于靓霞;间充质干细胞输注治疗重症肌无力的实验研究[D];北京协和医学院;2011年
5 朱丽君;重症肌无力动物模型的建立及中药治疗重症肌无力的机制研究[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵丽丽;肌力康饮对EAMG模型大鼠NMJ超微结构和外周细胞CD4~+细胞浓度的影响[D];黑龙江省中医研究院;2010年
2 董理;“温阳补气”针法对EAMG大鼠血清中IL-12、IL-18表达水平影响的研究[D];长春中医药大学;2012年
3 汪琳;“温阳补气”针法对EAMG大鼠血清TGF-β和TNF-α表达水平影响的研究[D];长春中医药大学;2012年
4 朱金莉;“温阳补气”针法对EAMG大鼠IgG、IgM表达水平影响的研究[D];长春中医药大学;2012年
5 程秀宇;“温阳补气”针法对EAMG大鼠RNS衰减值及血清AchR表达水平影响的研究[D];长春中医药大学;2011年
6 王利君;“温阳补气”针法对EAMG大鼠血清AchR-ab和IFN-γ表达水平影响的研究[D];长春中医药大学;2011年
7 刘莹;小剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力免疫调节作用的研究[D];山东大学;2012年
8 李克勇;雷公藤多甙治疗重症肌无力的机理探讨[D];四川大学;2003年
9 张云;雷公藤多甙对肌收缩影响及对治疗MG机理探讨[D];四川大学;2003年
10 李福金;Th17细胞在实验性自身免疫性重症肌无力发病机制中作用的研究[D];延边大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王振岭 杨叁平 李宗海;中药治疗重症肌无力机制被揭示[N];中国医药报;2006年
2 王振岭 杨三平 李宗海;骨髓间质干细胞移植结合中药治疗重症肌无力[N];健康报;2006年
3 ;重症肌无力研究获重大进展[N];科技日报;2004年
4 ;河北以岭医院[N];中国中医药报;2004年
5 陈金亮;重症肌无力治疗中如何撤减激素[N];工人日报;2000年
6 主任医师 陈金亮;重症肌无力的治疗如何撤减激素[N];科技日报;2000年
7 杨平;重症肌无力研究取得重大进展[N];科技日报;2004年
8 郁松;提升医药产业技术水平 促进医药行业不断发展[N];科技日报;2002年
9 杨平;治疗肌萎缩取得新进展[N];科技日报;2004年
10 主任医师 陈金亮;固本三法治疗重症肌无力[N];人民政协报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978