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基于花生四烯酸模型和T细胞模型的抗炎中药筛选研究

林力  
【摘要】:炎症是十分常见而重要的基本病理过程,可发生于机体的任何部位和任何组织,人类的大多数疾病常与炎症过程有关。炎症也是机体最重要的保护性反应,人类得以长期生存离不开炎症反应。但在某些情况下,炎症反应对机体也具有不同程度的危害,严重的炎症反应甚至可危及患者的生命。因此,积极研制各种药物,有目的地防止和控制炎症对机体造成的不利影响,将有着重要的意义。 目前市场上对于一些炎症尚无理想的安全有效治疗药物。糖皮质激素类药物虽疗效确切,但其所致毒副作用严重,常使治疗无法继续,且一旦停药后反跳现象严重;包括细胞毒类药物在内的免疫抑制剂往往毒性大,使病人难以接受和坚持治疗;免疫调节剂、炎症因子(包括炎症细胞因子、受体拮抗剂)、基因手段等生物治疗,则价格昂贵且疗效尚未完全肯定;传统的非类固醇抗炎药,虽有很好的抗炎作用,但其所致胃溃疡、胃出血、对肾脏的损伤等副作用也很严重;新一代的非甾体抗炎药虽然具有良好的抗炎作用,而且可以减少上述毒副作用,但其潜在的毒副作用尚有待于进一步的研究。由于上述的不足,从天然药物中筛选出安全有效的抗炎药已引起了人们高度关注。国内专家已对一些抗炎中草药及复方进行了研究,但尚未见到应用 5-LOX、COX-1 和 COX-2 进行的中药体外抗炎高通量筛选的报道,也没有应用多指标体外模型对中药进行综合评价的报道。本文旨在建立一套简便、快速、高效、经济的体外抗炎药物筛选模型,不仅可为实现中药的快速高效筛选,也可为新药的研制开发提供现代科学依据。本文的研究主要从以下五个方面进行: 1. 5-LOX 体外抗炎模型的研究 应用比色法,在分子水平建立和优化 5-LOX体外抗炎筛选模型,并以NDGA为阳性药验证模型的可靠性。应用该模型对 17 味中药和协和药物所高通量筛选样品库中的 14800个样品分别进行了测定,结果表明这 17 味中药中抑制率最高的是沙漠嘎全草,其次为沙漠嘎种子;在对样品库的测定中,对初筛抑制率超过 70%的样品进行复筛,并根据量效关系计算IC50。结果表明,在所筛的样品中具有良好量效关系的活性成分共有 40 个,活性样品的入围率为 0.27%。 2. COX-1 和 COX-2 体外抗炎模型的研究 采用差速离心法从牛的精囊腺制备 COX-1,并应用 SDS-PAGE 对其进行初步定性,应用 Bradform 法进行蛋白质的含量测定;采用自制备的 COX-1 和购买的 COX-2,建立了体外 COX-1 和 COX-2 抑制剂筛选模型,并以 SC-560(COX-1 inhibitor)和 Nimesulide(COX-2 inhibitor)为阳性药对上述所建模型进行验证。对 17 味中药的筛选结果显示,


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