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淫羊藿饮片指纹图谱的研究及炮制原理初探

于向红  
【摘要】:淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T. S. Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分。其性味辛、甘、温。生品祛风湿、坚筋骨力胜;羊脂油甘温,能温散寒邪,补肾助阳,淫羊藿油炙后补肾阳、强筋骨作用增强。 本论文是国家十五攻关课题“淫羊藿炮制工艺和质量标准规范化研究”的一部分,是在淫羊藿炮制工艺规范化研究的基础上对饮片指纹图谱和炮制原理的进一步研究,旨在为优化炮制工艺和完善质量标准提供参考依据,从而提高饮片的质量,保证临床用药的安全有效,基于此,我们主要从以下几个方面进行了研究。 1综合分析评价了淫羊藿化学成分,药理作用,炮制,体内代谢,指纹图谱,质量标准和临床应用等相关领域的研究文献,为制定切实可行的研究方案,确定研究工作起点奠定了坚实的基础。 2根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》和《中药注射剂色谱指纹图谱试验研究技术指南(试行)》,研究并初步建立了不同品种淫羊藿黄酮类成分HPLC指纹图谱;根据《中药指纹图谱相似度计算软件》分析评价淫羊藿中试样品相似度,结果表明:不同品种淫羊藿指纹图谱差异较大;同一品种不同产地淫羊藿成分组成和含量存在差异,同一品种同一产地淫羊藿质量比较稳定;我们确定的中试工艺条件稳定性和重现性均较好。指纹图谱中主要色谱峰基线分离良好,稳定性好,即可定性又可定量,因此我们采用指纹图谱法和紫外分光光度法对四个品种淫羊藿炮制前后朝藿定C、淫羊藿苷和总黄酮进行了含量测定,同时对炮制前后指纹图谱中变化特征峰进行分析,结果显示:四个品种淫羊藿炙后总黄酮含量降低;朝藿定C的含量均降低,淫羊藿苷的含量大部分升高;峰A的峰面积明显降低,淫羊藿次苷Ⅱ的峰面积升高。 3根据中试样品含测结果,结合朝藿定C和淫羊藿苷的结构式,推测淫羊藿饮片在加热过程中存在朝藿定C向淫羊藿苷的转化,为明确该推测是否存在,我们首次用朝藿定C,淫羊藿苷和总黄酮进行不同温度、不同时间加热炮制研究,又用淫羊藿饮片进行加热炮制验证,采用薄层色谱和指纹图谱相结合的方法进行分析,试验结果初步显示:在一定的条件下,朝藿定C转化为淫羊藿苷;淫羊藿苷比较稳定;单体的转化情况与在饮片的转化情况不完全相同。根据饮片加热炮制研究的结果,我们推测:淫羊藿炮制是一个多种化学成分之间相互制约、转化的过程,转化程度既与炮制温度和时间有关,也与黄酮类化合物各成分之间的含量和比例有关。 4我们采用同上方法分别对淫羊藿和巫山淫羊藿生、炙品饮片水煎液中主要成分随煎煮时间的变化情况进行研究,结果表明:巫山淫羊藿生、炙品中总黄酮,朝藿定C和淫羊藿苷的溶出率均随煎煮时间的延长逐渐升高,其中生品中淫羊藿苷的含量由0.31%升高至0.59%,朝藿定C的含量由3.15%降至2.37%;炙品中淫羊藿苷的含量由0.50%升高至0.69%,朝藿定C的含量由2.71%降至2.15%。淫羊藿生品中总黄酮和淫羊藿苷的溶出率均在1h时达到最高,随后逐渐降低,炙品中总黄酮和淫羊藿苷的溶出率在0.5h时达到最高,随后也逐渐降低。据此结果,我们得出如下结论:不同品种,不同炮制饮片应制定不同的煎煮时间:巫山淫羊藿叶质硬,适合久煎,煎煮时间越长,有效成分溶出越多;淫羊藿叶片较薄,常规煎煮时间即可,时间过长反而会促使有效成分损失。这一研究结果为淫羊藿的临床应用和制剂生产提供了理论依据。 通过对淫羊藿饮片指纹图谱和炮制原理的研究,我们发现,对于多来源的中药,其内在成分的组成和含量存在明显差异,且炮制过程中化学成分的变化情况也不同,水煎液中主要成分的变化规律也有差别。药典对不同品种饮片采用同一质量标准似有不妥,建议药典针对不同品种、不同炮制饮片建立相应的质量标准,保证饮片质量的稳定、可控,提高中医临床的疗效。 我们建立的指纹图谱法,可以分析淫羊藿炮制前后化学成分的变化情况,炮制原理的研究为完善炮制工艺和质量标准提供参考依据。


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