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脾虚模型脑内信号转导相关因子及其基因表达的研究

李娟  
【摘要】: 目的: 从五脏藏神理论出发,探讨脾胃与神志的密切联系。通过检测脾虚模型大鼠脑内信号转导相关因子表达的变化,探讨脾虚大鼠模型学习记忆变化机制。 方法: 理论方面:本研究从五脏藏神的角度出发,阐述了脾在五脏藏神理论中的重要地位,并通过对脾胃与神志相关理论的梳理,从生理、病理、治疗方面归纳了脾与神志相关理论的机制,同时,本文还对脾藏意主思中“意”和“思”的含义以及脾与脑相关等进行了探讨。 实验方面:以Wistar大鼠为研究对象,分为正常组、模型组、治疗1组(造模加灌胃归脾汤)、治疗2组(造模加灌胃柴胡疏肝散)。采用苦降泻下、饮食失节、劳倦过度相结合的方法,复制脾虚动物模型。观察大鼠的体重、进食量、外观表现和动态变化等对模型进行筛选。采用免疫组化方法检测BDNF、AChE、NOS和即早基因C-FOS,采用原位杂交方法检测即早基因C-JUN mRNA在脾虚大鼠脑内的表达变化,探索其与学习记忆的关系,从而为脾藏神理论提供实验依据。 结果: 1脾虚模型复制结果模型组大鼠从造模第三天起,开始出现类似脾虚的症状:大便溏泻,消瘦,扎堆,精神萎靡等。第八天症状最重,出现食少,稀便或粘液便,肛周毛色污秽,懒动,扎堆,眯眼,乏力,耳尖色淡,畏寒,尾凉,体重不增或增加缓慢甚或降低,背毛松散,毛色不荣或掉毛发枯表现;治疗1组在第一周也出现类似的情况,但此后症状逐渐减少消失,体重增长迅速。模型组的体重增长缓慢,体重较轻,与正常组比较,差异极显著(P0.01),说明造模成功。 2 BDNF、AChE和NOS的免疫组化检测结果 1) BDNF免疫阳性反应物在脾虚大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值降低,与正常组比较,差异极显著(P0.01);归脾汤治疗组(治疗1组)大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值升高接近正常组,与模型组比较,差异极显著(P0.01);治疗2组MOD值与模型组比较无显著差异。 2) AChE免疫阳性反应物在脾虚大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较高,与正常组比较,差异极显著(P0.01);归脾汤治疗组(治疗1组)大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较低与正常组类似,与模型组比较,差异极显著(P0.01);治疗2组MOD值与模型组比较无显著差异 3) NOS免疫阳性反应物在脾虚大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较低,与正常组比较,差异极显著(P0.01);归脾汤治疗组(治疗1组)大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较高接近正常组,与模型组比较,差异极显著(P0.01);治疗2组MOD值与模型组比较无显著差异。 3即早基因C-FOS的免疫组化、C-JUN的原位杂交检测结果 1) C-FOS免疫阳性反应物在脾虚大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较低,与正常组比较,差异极显著(P0.01);归脾汤治疗组(治疗1组)大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较高,与模型组比较,差异极显著(P0.01);治疗2组MOD值与模型组比较无显著差异。 2) C-JUN mRNA阳性细胞在脾虚大鼠脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较低,与正常组比较,差异极显著(P0.01);归脾汤治疗组(治疗1组)脑内海马、前额叶皮层和下丘脑MOD值较高,与模型组比较,差异极显著(P0.01);治疗2组MOD值与模型组比较无显著差异。 结论: 1脾藏神理论在五脏藏神理论中居于重要的地位,而在五脏皆藏神的整体协调关系中,脾胃起着枢轴或曰关键的作用。脾胃所化生的营血精微是产生神的物质基础,同时,脾的转枢气机和运化水湿的功能正常又是“神”正常表达的重要保证。脾藏意,主思,而“意”、“思”的含义包括了学习记忆的过程,脾与学习记忆关系密切。2采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度的方法复制脾虚模型,模型复制成功。3脾虚大鼠脑内与学习记忆有关的信号转导相关因子表达变化:AChE表达升高,BDNF、NOS、C-FOS和C-JUN mRNA表达降低;经归脾汤治疗后大鼠脑内AChE表达降低,BDNF、NOS、C-FOS和C-JUN mRNA表达升高,提示脾虚对大鼠学习记忆能力有一定的影响。4结合本课题组对脾虚大鼠行为学研究的结果,提示归脾汤通过调节脾虚大鼠脑内信号转导相关因子的表达而对学习记忆有明显的改善作用。


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