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益气活血解毒法对氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞粘附作用的影响

金潇  
【摘要】: 下肢动脉硬化闭塞症(ASO)是动脉粥样硬化物质不断扩大和继发血栓形成导致的下肢动脉管腔的狭窄、闭塞性病变。患肢表现为发冷、麻木、疼痛、间歇性跛行、动脉搏动消失、营养障碍、趾端、足部甚至小腿发生溃疡或者坏疽。患者生活质量严重下降,甚至失去肢体,严重者甚至危及生命对社会也是很大的负担。随着生活水平的提高、饮食结构的改变以及人均寿命的延长,ASO的发病率显示出上升趋势,成为严重危害人民健康的一种老年常见病和多发病,同时也是当前众多学者研究的重要科题。 近年来多数学者支持“内皮损伤反应学说”。认为本病各种主要危险因素最终都损伤动脉内膜,动脉硬化的始动环节是血管内皮损伤及内皮功能障碍,氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)和炎性反应在引起内皮功能障碍和启动动脉粥样硬化(AS)中发挥重要作用。 本研究试图探索益气、活血、解毒法中药对OX-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)时的粘附分子的基因表达、转录调控通路及与单核细胞粘附作用的机制,为中药制剂的联合应用治疗下肢动脉硬化闭塞症提供理论依据,并为中药干预下肢动脉硬化闭塞症的发病机理研究探索新途径和提供一种新的研究思路和方法。 (OX-LDL)诱导的HUVEC与单核细胞黏附率的影响研究 目的:探讨益气、活血、解毒法不同药物组合对单核细胞黏附率的干预作用。 方法:共分6组A、正常对照组B、OX-LDL损伤后的HUVEC C. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、活血、解毒组D. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、活血组E. OX-LDL损伤的HUVEC+活血、解毒组F. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、解毒组。提取健康人外周血单核细胞与各组HUVEC黏附作用1h后,BCA蛋白定量法测定每组单核细胞黏附率。SPSS16.0统计软件包进行数据分析。 结果:(1) OX-LDL能显著增加人脐静脉内皮细胞与单核细胞黏附率(P0.01)。(2)益气、活血、解毒三法不同药物组合后均能明显降低HUVEC与单核细胞黏附率(P0.01)。(3)不同治法药物组合组间,单核细胞的粘附率也有显著差异:①益气活血解毒组单核细胞黏附率最低;②益气活血组黏附率较高,数值仅低于不加药的OX-LDL损伤的HUVEC组;③含有解毒治法组的单核细胞黏附率均偏低。 2、OX-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1、VCAM-1、NF-κB p65的蛋白表达研究 目的:探讨益气、活血、解毒法不同药物组合对OX-LDL损伤后的HUVEC的ICAM-1、VCAM-1、NF-κB p65的蛋白表达表达的干预作用。 方法:共分10组A、正常对照组B、OX-LDL损伤后的HUVEC C. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、活血、解毒组D. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、活血组E. OX-LDL损伤的HUVEC+活血、解毒组F. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、解毒组。蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印记法检测中药干预后OX-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和NF-κB p65的蛋白表达,SPSS16.0统计软件包进行数据分析。 结果:其中VCAM-1在正常HUVEC组几乎不表达;NF-κB p65蛋白在有单核细胞粘附作用的4、8、9组均有显著表达。 3、OX-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1、VCAM-1、NF-κB p65的mRNA表达研究 目的:探讨益气、活血、解毒法不同药物组合对OX-LDL损伤后的HUVEC的ICAM-1、VCAM-1、NF-κB p65的mRNA表达的干预作用。 方法:共分10组A、正常对照组B、OX-LDL损伤后的HUVEC C. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、活血、解毒组D. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、活血组E. OX-LDL损伤的HUVEC+活血、解毒组F. OX-LDL损伤的HUVEC+益气、解毒组。荧光实时定量PCR法检测中药干预后OX-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和NF-κBp65的mRNA表达。采用SPSS 16.0统计软件,计量资料用均数士标准差表示,多组间计量资料的比较采用方差分析,组间比较用LSD法,P0.01统计学上认为具有显著性差异。 结果:益气、活血、解毒法可明显降低ICAM-1和VCAM-1的mRNA和蛋白的表达水平,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P0.01)。 总结论:益气、活血、解毒法能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达;推测是通过抑制NF-κβ,抑制单核-血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减少或抑制动脉粥样硬化的形成。


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