西印度樱桃冻干粉活性成分提取工艺、生物活性及稳定性的研究

【摘要】：西印度樱桃(Malpighia glabra DC),为目前所有果树种类中果实维生素C含量最高者,因其营养价值高、天然还原型维生素C含量高,越来越受到人们的关注。 国内目前对西印度樱桃仅限于引种栽培和食品饮料加工方面的研究,国外对西印度樱桃冻干粉的加工进行了研究。西印度樱桃冻干粉在化妆品中的应用,国内外均未见报道。本课题首次从化妆品应用角度出发,对西印度樱桃冻干粉提取物进行全面、综合的研究开发和利用,为西印度樱桃资源开发利用、其功效产品的产业化发展提供理论依据。 本课题以西印度樱桃冻干粉为研究对象,研究了西印度樱桃冻干粉的提取工艺,确定最佳料液比、提取时间、温度、提取液中主要成分,并对提取液进行脱盐处理;对提取液的抗氧化功效、美白功效以及刺激性进行了研究;并最终形成提取液中还原型维生素C相对稳定体系。 研究结果如下: 1.西印度樱桃提取液最佳提取条件为:料液比为1:10,常温条件下搅拌浸提1小时。离心过滤后得到的提取液中还原型维生素C含量为10±0.3mg/ml,多糖含量为25.3mg/ml,蛋白含量为1.02mg/ml,烟酰胺(V_(B3))的含量为46.8mg/L。 2.筛选出合适的提取液脱盐树脂,即阳离子树脂T_(212)、阴离子树脂T_(112),过滤体积达42个柱体积,脱盐过程Vc损失率为14.2%,为工业化生产提供了数据支撑。 3.采用不同的自由基体系对提取液体外抗氧化活性进行了的研究。结果表明,当提取液稀释20倍(其中Vc含量为500μg时),提取液对超氧阴离子自由基清除率为90.3%;稀释50倍的提取液(Vc含量为160μg)时,羟自由基清除率达到92.2%;提取液中Vc浓度为40μg/ml时,DPPH.清除率达到90%以上。此结果表明,提取液与同浓度的Vc相比,清除自由基的能力更强,表明提取液中不但有Vc在起作用,也含有其它活性成分,例如烟酰胺,是各种组分共同作用的结果。 4.通过生化酶学法检测提取液对酪氨酸酶的活性抑制效果,结果表明:提取液在2.5%浓度即还原型Vc含量为0.25mg/mL时对酪氨酸酶活性的抑制率达到99.1%; 5.动物细胞实验检测提取液对小鼠B16黑素瘤细胞增殖抑制率的影响,细胞内黑色素含量和细胞内酪氨酸酶活力测定。结果表明:MTT实验证明不同浓度的提取液对黑素瘤B16细胞增殖活力基本无影响,但能够使黑素含量减少,酪氨酸酶活性降低,能够抑制细胞内酪氨酸酶mRNA表达。同分析纯Vc相比,提取液抑制细胞内酪氨酸酶mRNA表达的效果更明显,表明提取液的美白效果更显著。动物细胞实验将对细胞的毒性和酶活性抑制作用区别开来,在天然活性物对细胞增殖无明显抑制的条件下来研究其对酶活性的作用强弱具有可行性。 6.体外人体美白试验结果,证实提取液能够使皮肤黑素含量降低、L值升高。但并不是浓度越高效果越好,存在皮肤最大吸收量问题。 7.利用红细胞溶血试验检测取液对细胞膜的刺激性。结果表明,不同浓度的西印度樱桃冻干粉提取液的溶血率均低于5.0%,提取液对细胞膜无损伤。证明提取液无强烈的刺激性。 8.建立了提取液相对稳定体系。即用煮沸冷却至室温的去离子水浸提,料液比为1:10,常温条件下搅拌浸提1小时。离心过滤后得到的提取液,加入30%(质量比)的多元醇,均匀搅拌,灭菌保存。 本实验对西印度樱桃冻干粉提取工艺进行优化,验证了提取液在化妆品方面具有延缓衰老、美白等功效,并构建了提取液相对稳定体系,为西印度樱桃资源开发利用提供了理论和数据支撑。