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天麻素干预急性脑缺血再灌注损伤及促血管新生的调控机制研究

程阳阳  
【摘要】:目的:利用斑马鱼微血管缺失模型,探究天麻素的促血管新生作用。建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,评价天麻素对脑缺血再灌注损伤的药理作用,并对天麻素促神经发生进行初步探究。方法:1、观察天麻素对微血管缺失斑马鱼肠下血管面积和肠下血管分支数的影响,评价天麻素的促血管新生作用。2、采用改良Longa方法建立大鼠大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型并对模型进行评价。3、利用大鼠神经功能评分、TTC染色、新物体识别、Morris水迷宫和脑萎缩体积检测对天麻素干预脑缺血再灌注损伤进行药效学评价。4、采用免疫荧光技术观察天麻素对MCAO大鼠脑组织vWF、GFAP表达的影响。5、采用western blot方法检测大鼠脑组织NeuN、GFAP的表达水平。结果:1、与空白组相比,模型组斑马鱼的肠下血管面积和肠下血管分支数明显减少(P0.01);与模型组相比,天麻素高中低剂量均能增加斑马鱼肠下血管面积和肠下血管分支数。2、模型组大鼠脑组织切片出现约1/3的梗死面积,神经功能缺损严重。与模型组相比,天麻素高剂量(P0.01)、低剂量(P0.05)均能使MCAO大鼠神经功能评分降低;与模型组相比,天麻素能提高MCAO大鼠的新物体辨识能力。Morris水迷宫实验表明,与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P0.01),逃避路程增加(P0.01),在平台象限的时间和穿环次数减少(P0.05)。与模型组比较,天麻素高剂量(P0.05)、低剂量(P0.01)明显缩短MCAO大鼠的逃避潜伏期和逃避路程,增加其在平台象限的时间和穿环次数。3、模型组大鼠脑萎缩明显,与模型组相比,天麻素高剂量(P0.01)、低剂量(P0.05)明显减少大鼠脑萎缩体积。4、模型组较假手术组大鼠,脑组织vWF阳性细胞表达增加。天麻素高、低剂量组较模型组,vWF的表达增加(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠的皮层及纹状体有大量GFAP阳性细胞表达,与模型组比较,天麻素高剂量(P0.01)、低剂量(P0.05)能降低GFAP表达水平。5、与假手术组比较,模型组NeuN的表达减少(P0.05),与模型组相比,天麻素高、低剂量(P0.05)均能显著增加NeuN的表达;与假手术组相比,模型组GFAP表达增加(P0.01),天麻素高低剂量减少GFAP表达(P0.05)。结论:1、天麻素可显著促进微血管缺失斑马鱼的血管新生。2、天麻素可明显改善MCAO大鼠的神经功能缺损,提高其学习记忆能力,减少大脑萎缩,对防治脑缺血再灌注损伤具有明显效果。3、天麻素能提高大鼠脑组织vWF的表达水平,具有明显的促血管新生作用,同时,能减轻反应性星形胶质细胞的损伤作用。4、对天麻素调控脑缺血再灌注损伤后的神经发生进行初步探究,结果表明,天麻素具有促进神经干细胞向成熟神经元分化的作用。


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