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大豆组织培养体系的优化及EPSPS遗传转化的研究

王婉婉  
【摘要】: 通过基因工程的方法将抗除草剂基因转入到目前生产上正在应用的大豆品种中,可以为培育抗除草剂品种提供育种材料。成功的遗传转化依赖于良好的再生系统,目前,大豆的组织培养仍存在很多问题,本实验旨在完善大豆组织培养及转化体系,从而缓解大豆再生频率及遗传转化率低的难题,同时提高再生苗移栽的成活率。使用农杆菌介导的大豆子叶节转化方法,对受体大豆品种黑农37、北京小粒豆进行了遗传转化的研究,建立了较为完善的大豆遗传转化体系。实验中利用子叶节方法转化北京小粒豆,已得到抗性植株225棵,种子38粒。 研究表明大豆种子利用氯气灭菌法灭菌,利用300mL的密封杯,每次20mL次氯酸钠加2mL浓盐酸,灭菌时间5h效果良好,既能保证灭菌效果,又不明显降低大豆发芽率。向发芽培养基中添加大约2mg/L的BAP可以提高遗传转化率。实验还得出最适宜的丛生芽诱导延迟培养天数为7天,可缓解丛生芽分化过多而很难伸长的问题。 农杆菌介导的大豆子叶节法转基因,当采用草甘膦作为转化筛选剂时,对于大豆品种黑农37和北京小粒豆,在芽诱导筛选阶段合适的筛选浓度10~15mg/L,不应低于10mg/L。大豆的生根培养基一般都添加IBA,但生根培养基中的IBA会诱导幼苗基部愈伤组织的膨大,移栽后常常会因染菌而死亡。在切下幼芽之后基部蘸少许IBA溶液,一般幼苗都可顺利生根,提高了移栽成活率。


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