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胸腺素α_1和抗SARS八肽的化学合成与分离纯化

黄永东  
【摘要】:本文系统研究了不同缩合剂对固相化学合成胸腺素α1的影响,并对其合成工 艺和分离纯化工艺进行优化。最佳的合成工艺为:以HBTU为缩合剂,以 2-4 当 量的试剂(前 11 个氨基酸为 2 当量,后续的为 4 当量),平均 11h/氨基酸的缩合 速度化学合成胸腺素α1;缩合后和脱保护后的洗涤次数均以 6 次为宜。该条件下 合成的胸腺素α1的粗品收率为 89.9%,纯度为 31.2%,目标物胸腺素α1的收率为 28.0%,单位成本为 2.49 RMB/mg胸腺素α1。分离纯化工艺为:首先以离子交换 层析法对胸腺素α1粗品进行初步的分离纯化,以除去粗品中大量的杂质。采用 DEAE Sepharose Fast Flow填料,pH5.8 的 0.02mol/L磷酸钠缓冲液以及pH5.8 的 0.5mol/L氯化钠和 0.02mol/L磷酸钠缓冲液,上样量为 50mg。经层析后产品的纯 度提高到 75%,收率为 60%。然后以反相高效液相层析法对胸腺素α1进行最终 的纯化。采用C18 柱,以 0.1%TTA为离子对试剂,乙腈线性梯度洗脱,上样量 为 50mg。反相层析后产品的纯度达到 95%,收率为 60%。两步纯化的总收率为 36%,纯度符合要求,纯化规模达到半制备水平,为胸腺素α1的工业化奠定了基 础。 此外,还首次 K. C. Chou 等筛选的抗 SARS 八肽进行了探索和研究,着重考 察了不同的缩合剂和缩合时间对化学合成抗 SARS 八肽的影响,建立八肽的合成 工艺和分离纯化工艺。其最佳的合成工艺为:以 HBTU 为缩合剂,以 2 当量的 试剂,平均 5 h/氨基酸的缩合速度化学合成八肽。该条件下合成的八肽的粗品收 率为 87.6%,纯度为 72.8%,目标物八肽的收率为 63.8%,单位成本为 1.23RMB/mg 八肽。其分离纯化工艺为:以制备型 RP-HPLC 对八肽进行分离纯化,采用 C18 柱,以 0.1%TFA 为离子对试剂,乙腈线性梯度洗脱,上样量为 10mg。反相层析 后产品的纯度达到 95%,符合对纯度的要求,收率为 65%。活性测定结果表明 八肽对SARS病毒有很强的抑制作用,具有开发为治疗SARS的多肽药物的前景。


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