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质粒DNA发酵与分离纯化过程的研究

黄慧  
【摘要】:本论文以含有质粒pcDNA3的E. coli DH5α菌株为对象,系统地研究了从发酵到细胞裂解,再到阴离子交换色谱纯化的质粒大规模制备过程。 首先在摇瓶中进行的正交试验用以考察选定因素以及每个因素的各个水对 质粒菌发酵中菌体浓度的影响程度。根据实验结果选取利于质粒菌高密度发酵 的最优化条件进行质粒的生产。同时进行了大肠杆菌生长曲线的测定和质粒小 量制备纯化及含量测定的实验,以研究该质粒在发酵液中含量同宿主菌生长曲 线的关系,找出收获质粒的最佳时间。 然后重点研究了含有质粒pcDNA3的大肠杆菌E. coli DH5α在发酵罐中的高密度发酵。分别详细考察了间歇发酵和流加发酵过程。研究了包括菌体生长和质粒含量等的关系。 最后用碱裂解法裂解细胞提取质粒,并将提取物进行阴离子交换层析以进一步纯化质粒。通过改变层析条件,例如阴离子交换固定相,流动相组成,洗脱方法,上样量等,得到不同的洗脱结果,最终确定阴离子交换色谱纯化质粒的理想操作条件。


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