丹参及甘草组织培养的研究

【摘要】：本文对丹参和甘草的组织培养进行了初步研究。 1丹参方面:以丹参的叶片为外植体,诱导出愈伤组织;再从愈伤组织上诱导出不定根。在此基础上,建立了丹参酮ⅡA和原儿茶醛的高效液相测定方法,并对影响丹参不定根组织培养的一些因素进行了探讨。结果如下: (1)确定了丹参不定根的诱导和继代培养基,为含有3%蔗糖、吲哚丁酸(IBA)2mg·L~(-1)、激动素(KT)0.2mg·L~(-1)的MS培养基。(2)蔗糖浓度为60g·L~(-1)时,丹参不定根的增殖倍数最高,为8.0;蔗糖浓度为20g·L~(-1)时,丹参不定根中丹参酮ⅡA的含量最高,为0.012mg·g~(-1);蔗糖浓度为30g·L~(-1)时,原儿茶醛的含量最高,为0.22mg·g~(-1)。(3)培养基的初始pH值为6.5时,丹参不定根的生长情况最好,其增殖倍数为5.1;初始pH值为5.5和6.0时,丹参不定根中丹参酮ⅡA的含量最高,为0.033mg·g~(-1);初始pH值为5.8时,其原儿茶醛的含量最高,为0.22mg·g~(-1)。(4)当接种量为2.5%时,丹参不定根的生长情况最好,增殖倍数为4.0。(5)培养基中IBA的浓度为2mg·L~(-1)时,丹参的增殖倍数最高,为4.17;IBA的浓度为2mg·L~(-1)、KT浓度为1mg·L~(-1)时,丹参酮ⅡA的含量最高,为0.19mg·L~(-1);IBA的浓度为0mg·L~(-1)、KT浓度为0.5mg·L~(-1)时,原儿茶醛的含量最高,为0.34mg·g~(-1)。(6)当NH4+和N03-总浓度为60mM·L~(-1)时: NH~(4+)/NO_3-为1:4时,不定根的增殖倍数最高,为5.38;NH~(4+)/NO_3-为0时,丹参酮ⅡA和原儿茶醛的含量最高,分别为0.037mg·g~(-1)和0.34mg·g~(-1)。(7)超声处理对丹参不定根的生长和其次生代谢都有影响。在150W下处理3min时,增殖倍数最大,为2.01;在300W下处理3min时,其丹参酮ⅡA的含量最高,为0.67mg·g~(-1),是对照组的20多倍;在500W下处理3min时,其原儿茶醛的含量最高,为0.21mg·g~(-1),是对照组的1.75倍。2.甘草方面:通过对甘草愈伤组织的初步研究,发现以0.5cm根中部为外植体,接种于含有2,4-D 2mg·L~(-1)、KT 0.7mg·L~(-1)的MS培养基中,诱导愈伤组织最佳,其诱导率为98%。在上述条件下,第15d左右对愈伤组织进行继代较为适合。