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W198作用机理的定量蛋白质组学研究

谭颖  
【摘要】: 为了研究国家I类抗癌新药5-溴粉防己碱(W198)的作用机理,本研究从定量蛋白质组学的角度,采用18O标记法,动态、整体、定量地考察了人慢性髓系白血病K562细胞在W198作用后多种蛋白质表达发生的变化,分别以正常K562细胞和粉防己碱(Tet)作用后的K562细胞为参照,找出W198作用K562细胞后表达量发生变化的差异蛋白。利用生物学相关知识,从差异蛋白的功能角度初步阐述了W198的作用机理并为进一步研究奠定了基础。主要结果如下: 通过W198对K562细胞生长抑制的研究发现,W198对K562细胞生长的抑制作用具有明显的浓度依赖性。确定了作用浓度1.5mg/L,作用时间大于18h的研究条件。 经过优化和评估认为,18O标记法是一种可信的定量蛋白质组学研究方法,可以用于W198作用K562细胞所提取的水溶性总蛋白样品的应用研究。0.5-2.0这个范围作为蛋白表达量未发生变化的标准具有可信性,即蛋白质表达量0.5以下,或都在2.0以上之外时,才认为该蛋白为差异蛋白。 在所鉴定得到的155个可信蛋白中,以正常K562细胞为参照,W198作用后的K562细胞共有16个蛋白表达量发生变化,其中8个上调,包括高迁移率蛋白B2,抗氧化蛋白-2,真核起始因子4A-I等;8个下调,包括TCP-1,GRP94,GST-π,S-甲酸基谷胱苷肽水解酶,泛素结合酶E2 L3等。以Tet作用后的K562细胞为参照,W198作用后的K562细胞共有8个蛋白表达量发生变化,其中5个上调,包括热休克蛋白90-β,核糖核酸抑制因子等;其中3个下调,磷酸甘油酸激酶,白介素增强结合因子3等。这些被抑制和被激活的蛋白可能是W198作用的靶点。


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