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茶黄素的酶促合成及其分离纯化

宋金隆  
【摘要】:茶黄素是指红茶中溶于乙酸乙酯成橙黄色的物质,由多酚类及其衍生物氧化缩合而来。茶黄素巨大的药用价值和经济价值使得对其纯度的要求极高,天然物质中茶黄素的含量极低,且提取难度大,采用多酚氧化酶酶促氧化合成茶黄素再对其进行分离纯化,可大大提高茶黄素的提纯量和提出物的品质。 以梨、马铃薯、苹果及鲜茶叶为酶源物,提取多酚氧化酶,采用考马斯亮蓝测定蛋白质含量,结果分别为110.03μg/mL.2.137mg/mL、318.8μg/mL及200.8μg/mLo以邻苯二酚为底物,选择温度、pH、底物浓度及不溶性聚乙烯吡咯烷酮四因素进行单因素及正交试验,其梨多酚氧化酶的最适氧化条件为温度25℃、pH6.0、底物浓度0.12mol/mL、PVPP添加量0.75g,马铃薯多酚氧化酶的最适氧化条件为温度30℃、pH7.0、底物浓度0.12mol/mL、PVPP添加量0.45g,苹果多酚氧化酶的最适氧化条件为温度25℃、pH5.0、底物浓度0.12mol/mL、PVPP添加量0.75g,鲜茶叶多酚氧化酶的最适氧化条件为温度30℃、pH6.0、底物浓度0.14mol/mL、PVPP添加量0.75g。其相对活性大小为梨马铃薯苹果鲜茶叶。在最适氧化条件下,以茶儿茶素为底物,通过酶促氧化合成茶黄素并比较其生成量,结果表明梨多酚氧化酶对此底物的氧化形成茶黄素的转化率最大。 选用梨为多酚氧化酶酶源物,酶促氧化合成茶黄素,高效液相色谱法检测茶黄素纯度,并选用Sephadex LH-20及聚酰胺吸附树脂对茶黄素粗品进行分离纯化,结果显示茶黄素粗品中四种主要茶黄素含量分别为TF0.106mg/mg TF-3-G0.045mg/mg, TF-3'-G0.181mg/mg, TFDG0.058mg/mg, TFs总量纯度为39%,制率为72.8%。茶黄素粗品经过Sephadex LH-20层析柱先后分离出TF、TF-3-G+TF-3'-G及TFDG,其相对峰面积分别为9.274%、67.442%及65.116%。经过聚酰胺吸附树脂纯化后,茶黄素相对峰面积达到52.688%。


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