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食品中阿维菌素类药物酶联免疫检测方法的研究

于姣  
【摘要】:本论文对阿维菌素类药物的酶联免疫分析方法进行了研究。 将阿维菌素进行结构改造制备半抗原,先用叔丁基二甲基氯硅烷将C5-OH选择性保护,进一步用琥珀酸酐将C4”-OH琥珀酰化,最后脱去保护基,合成出阿维菌素特异性半抗原。利用活化酯法将半抗原与载体蛋白BSA偶联制备免疫抗原,采用NHS法将半抗原与OVA偶联制备包被原。通过免疫新西兰大白兔获得高亲和性的抗体,该抗体对阿维菌素类药物有较高的交叉反应,阿维菌素为100%,埃普里诺菌素为123%,伊维菌素为21.9%。 以此抗体为基础,通过条件优化建立酶联免疫检测方法,可同时检测食品中阿维菌素类药物残留。此法灵敏度较高,阿维菌素灵敏度IC50为1.92±0.3ng/mL,检测限IC15为0.13±0.03ng/mL;伊维菌素IC50为8.75±0.5ng/mL,IC15为=0.55±0.05ng/mL;埃普里诺菌素IC50为1.56±0.3ng/mL, IC15为0.10±0.02ng/mL。在对实际样品进行检测的研究中,选取了牛肉、猪肉、猪肝、梨作为主要研究对象考察了他们的基质影响及去除方法。在方法的准确性实验中,在10、40、100μg//kg三个加标水平上,间接竞争酶联免疫检测方法的回收率在75.20%-89.78%。 应用高效液相色谱检测方法,对建立的阿维菌素间接竞争ELISA检测方法的准确性进行了验证,两种方法所得结果的线性相关系数R2值为0.9862。 通过上述内容的研究,所建立的ELISA方法可以有效地进行阿维菌素类药物的残留检测,为进一步研发阿维菌素多残留试剂盒奠定了基础。


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