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四角蛤蜊糖胺聚糖的提取、纯化及生理活性研究

孙晓朋  
【摘要】:糖胺聚糖是由含已糖醛酸和己糖胺成分的重复二糖单元连接成的直链杂多糖,具有抗凝血、抗肿瘤、降血脂等多种生物学活性。研究表明,贝类中含有丰富的糖胺聚糖。四角蛤蜊是一种重要的海洋食用经济贝类,同时具有较大的药用和保健作用,开展四角蛤蜊糖胺聚糖的提取,纯化和生理活性研究,可以为四角蛤蜊资源的高值化开发利用提供理论依据,为新型药物先导化合物的开发探索一条新途径。本研究的主要内容如下: 在单因素试验的基础上,利用SAS软件和响应面分析相结合的方法对四角蛤蜊糖胺聚糖的提取工艺进行了优化。通过试验得到了二次多项式回归模型,该模型能较好的反映各因素与响应值之间的关系。最佳提取工艺的条件是水料比3:1,酶解时间3.5h,酶添加量1.0%。在此条件下,糖胺聚糖的提取率可达0.448%。 对糖胺聚糖的粗提物进行纯化以除去蛋白质、色素和无机盐等杂质。一次纯化采用吸附法、透析法和等电点沉淀法得G1,回收率41.54%,其GAG含量由34.46%提高到82.92%;二次纯化采用季铵盐络合法得G2,回收率为87.22%,GAG含量由82.92%提高到95.03%。 对纯化后的糖胺聚糖进行紫外光谱扫描和琼脂糖凝胶电泳。紫外扫描光谱显示,纯化后糖胺聚糖在280nm和260nm附近没有明显的吸收峰,说明纯化后样品中蛋白质和核酸含量很低,杂质基本被除去。琼脂糖凝胶电泳显示,与标品相比,四角蛤蜊GAG图谱斑点有明显的拖尾,表明制品中糖胺聚糖种类不均一或分子量分散性较大。 对四角蛤蜊糖胺聚糖体外清除自由基和体外抗凝血作用进行了研究。结果表明,其对羟基自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除作用,具有一定的抗凝血活性,但其作用强度与肝素比相对较弱。


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