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阿特拉津荧光免疫分析方法的研究

师英杰  
【摘要】:本文以农药阿特拉津为目标物,利用上转换荧光纳米材料和荧光微球做为标记材料,分别建立了一种上转换荧光标记-磁分离免疫检测方法和一种荧光微球标记免疫层析定量检测方法,实现了食品中阿特拉津的快速定量检测。采用热分解法制备油溶性上转换纳米材料(OA-UCNPs),采用配体交换法(PAA)对材料进行表面修饰,制备了水溶性上转换荧光纳米材料(PAA-UCNPs)。采用活化酯方法将上转换纳米材料与阿特拉津抗体偶联制备荧光信号探针,将磁性聚苯乙烯微球与包被原偶联制备捕获探针。经过条件优化,当信号探针添加量为70μL、捕获探针添加量为50 μL,孵育时间为50 min时,建立了阿特拉津上转换荧光标记-磁分离免疫检测方法。该方法检测限为0.005 μg L-1,线性范围在0.005~10 μg L-1,方法对扑灭津和扑草净具有与阿特拉津相近的识别能力,可以用来同时检测ATR、扑灭津和扑草净三种除草剂。鲜榨甘蔗汁和河水样品不需要任何处理可以直接检测,玉米和大米样品需要经过简单提取后,再用PBS(pH 7.4)将样品提取液稀释5倍后进行检测。获得的阿特拉津添加回收率在84.68%-110.3%之间,所的结果与LC-MS/MS分析结果有较好的一致性(R2=0.9927)。采用活化酯法将阿特拉津包被原(ATR-OVA)与羧基功能化的荧光微球偶联制备荧光探针(FMs-Ab)。通过对试纸条C线二抗和T线包被原的包被浓度、样品稀释液的种类、硝酸纤维素膜的种类、荧光探针和工作液的添加量进行优化,确定最佳工作条件,建立了荧光微球标记免疫层析定量检测方法。该方法检测限为0.01μg L-1,方法对扑灭津和扑草净具有与阿特拉津相近的识别能力,可以同时检测ATR、扑灭津、扑草净三种除草剂。鲜榨甘蔗汁和水样品分别用PB(pH 6.0)稀释15倍和5倍后可以用于检测,玉米和大米样品提取液用PB(pH 6.0)稀释20倍后进行检测。获得的阿特拉津添加回收率在83.27%-115.5%之间,与LC-MS/MS分析结果有较好的一致性(R2=0.9912)。


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