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电融合选育耐高温、浓醪酒精发酵株的研究

蒋岳  
【摘要】: 本论文对出发菌株的特性、Y111·6(α)单倍体遗传标记的制备、制备原生质体的条件、进行电融合的各项参数、融合子的筛选及融合子的稳定性和发酵性能进行了研究。 以Y316和Y111的二倍体细胞为出发菌株,经分离单倍体、确定接合型后筛选出性状优良、遗传稳定的的单倍体细胞。 以Y111·6(α)型单倍体细胞为出发菌株,确定了进行紫外诱变筛选营养缺陷型的最佳条件:照射时间为90s。在此条件下,挑选出了遗传稳定性状优良的精氨酸缺陷型菌株。 本论文确定了制备高形成率和再生率的原生质体的最佳条件,如菌体培养时间、酶浓度、及酶解时间等,讨论了形成率和再生率之间的关系。 本论文详细的研究了影响原生质体电融合的各项参数。通过正交实验确定了进行电融合实验的最佳参数:脉冲场强为6kv/cm、脉冲时间常数为30μs、脉冲个数为5个。 通过制备遗传标记和选择性培养,筛选出了融合子,并对融合子F79的遗传稳定性进行了研究,初步测定了融合子的发酵能力。


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