收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Wnt信号诱导人晶状体上皮细胞上皮间充质转化和增殖的研究

包秀丽  
【摘要】:目的: 后囊下混浊(posterior capsular opacification, PCO)是白内障摘除术后最常见的并发症,常常导致术后视力下降。晶状体上皮细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和增殖在PCO的发生和发展中起重要作用。Wnt配体蛋白参与调控细胞增殖、迁移及分化等众多生理过程,对人晶状体上皮细胞中Wnt3a介导的经典wnt信号通路目前研究甚少。本研究将wnt3a与经典wnt信号通路相关联,通过构建wnt3a过表达载体应用转染技术使人晶状体上皮细胞中过表达wnt3a配体蛋白,激活经典wnt信号通路,探讨其对晶状体上皮细胞EMT和增殖能力的影响,初步明确wnt在晶状体上皮细胞发生PCO的作用机制。同时,力求从中找到新的靶点。 方法: 1.构建Wnt3a过表达载体,转化大肠杆菌,酶切、测序进行鉴定。 2.应用Lipo2000转染技术转染Wnt3a过表达载体,人晶状体上皮细胞HLE B-3细胞和SRA01/04细胞过表达Wnt3a蛋白,用Western Blotting技术验证其表达。 3.用趋化运动实验和划痕实验检测Wnt3a过表达对晶状体上皮细胞的迁移运动能力影响。 4.采用MTT和流式细胞仪检测Wnt3a过表达对细胞增殖能力的影响。 5.用Western Blotting检测Wnt3a过表达后其下游信号分子β-catenin的活化程 度。用免疫荧光的方法检测β-catenin在细胞中的定位情况,观察在Wnt3a 刺激后,它们的分布变化,进一步明确Wnt/β-catenin信号通路的激活状态。 6.应用Western Blotting方法检测Wnt3a过表达对晶状体上皮细胞EMT标志蛋白和相关核内靶基因表达的影响,用免疫荧光的方法检测上皮和间充质标记蛋白在细胞中的定位情况,进一步明确Wnt/β-catenin信号通路在调控晶状体上皮细胞形成PCO中的分子机制。 结果: 1.成功构建Wnt3a-pcDNA3真核表达载体,基因测序与Genebank一致。 2.正常人晶状体上皮细胞系仅有少量Wnt3a表达。Wnt3a-pcDNA3瞬时转染后获得Wnt3a过表达晶状体上皮细胞系。 3. wnt3a过表达上调HLE B-3细胞内β-catenin的蛋白表达,并促使HLE B-3细胞和SRA01/04细胞内的β-catenin细胞定位由胞浆转入胞核。 4.与对照组相比,Wnt3a过表达的HLE B-3细胞和SRA01/04细胞的迁移运动能力比对照组细胞明显增强(P0.01)。 5. Wnt3a过表达促进HLE B-3细胞和SRA01/04细胞的增殖(P0.01),细胞周期分析发现在S期细胞的比例升高。 6.与对照组相比,Wnt3a过表达的HLE B-3细胞和SRA01/04细胞的上皮表型E-cadherin表达降低,间质表型fibronectin表达升高;并且经免疫荧光实验证实,Wnt3a过表达的HLE B-3细胞和SRA01/04细胞发生EMT。 7. Wnt3a过表达使HLE-B3细胞和SRA01/04细胞中Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达上调。 结论: 1. Wnt3a-pcDNA3真核表达载体能有效上调人晶状体上皮细胞Wnt3a蛋白的表达,使Wnt/β-catenin信号通路活化。 2. Wnt3a过表达能够增强晶状体上皮细胞的运动迁移能力。 3. Cyclin D1和c-Myc是Wnt/p-catenin信号通路的下游信号分子,Wnt3a通过激活Wnt/β-catenin信号通路,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达上调,促进晶状体上皮细胞增殖。 4. Wnt3a过表达诱导晶状体上皮细胞发生上皮间充质转化。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 翁景宁,张惠蓉;PCNA反义寡脱氧核苷酸对牛晶状体上皮细胞体外增殖活性的影响[J];眼科研究;2001年03期
2 刘宝海,谭少健,韦敏怡,梁皓,李霞,蒋林志;γ干扰素对兔晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响[J];眼科;2004年05期
3 谭健,姚克,王凯军,徐雯,申屠形超;环孢素A对兔晶状体上皮细胞增殖的影响[J];眼科研究;2005年02期
4 谭浅,罗栋强,蒋剑;骨桥蛋白在白内障晶状体上皮细胞中的表达[J];国际眼科杂志;2005年04期
5 张雪岩,张劲松,孔玮;人晶状体上皮细胞内热休克蛋白mRNA的表达[J];眼科新进展;2005年05期
6 崔璟琳;高维奇;刘平;关立南;于莉;;晶状体上皮细胞DNA损伤的SCGE测定法[J];哈尔滨医科大学学报;2006年05期
7 屈思萌;张伟;安莹;宋旭东;;NADPH氧化酶参与人晶状体上皮细胞增殖及其表达[J];眼科;2009年02期
8 周健,惠延年,李燕,林英华,焦西英,蔡翔;老年性白内障晶状体上皮细胞的形态学变化[J];第四军医大学学报;2000年12期
9 范芳,葛正龙,李长福,曾小平,李海祥;c-myc ASODN对半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中cMyc蛋白表达及细胞周期的影响[J];第四军医大学学报;2004年11期
10 饶惠英,姚克,汤霞靖,徐雯;Quercetin对晶状体上皮细胞HSP70、HSP27表达的调节作用[J];眼科研究;2005年02期
11 洪伟;刘庆淮;谢平;;年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的超微结构观察[J];解剖学研究;2006年02期
12 杨丽英;黄秀榕;祁明信;胡俊;;晶状体蛋白质与蛋白质组学的研究进展[J];广州医学院学报;2006年03期
13 杨丽英;黄秀榕;祁明信;胡俊;;晶状体蛋白质与蛋白质组学的研究进展[J];福建中医学院学报;2006年05期
14 李桂荣;苏冠方;周鸿雁;;老年白内障晶状体上皮细胞凋亡及凋亡基因的表达[J];中国老年学杂志;2007年12期
15 张虹,李贵刚,谢二娟;不同类型白内障晶状体上皮细胞密度分析[J];眼科新进展;2003年04期
16 万光明,张效房;逆转录病毒载体携带自杀基因对晶状体上皮细胞的抗增生作用[J];眼科研究;2004年05期
17 王艳青,李秋明;无血清的眼组织对晶状体上皮细胞的培养[J];临床医学;2005年01期
18 魏敏,樊映川;后发性白内障细胞及分子生物学机制[J];实用医院临床杂志;2005年04期
19 彭秀军;何守志;徐绍娟;李娜;;大鼠晶状体海水浸泡伤的形态学变化[J];国际眼科杂志;2005年06期
20 李青;杨佩菲;;凋亡相关基因Caspase-9在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义[J];福建医药杂志;2006年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 邵娜;纪春岩;;组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过活化Wnt信号通路抑制急性淋巴细胞白血病的研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
2 陆群;董金山;郝靖惠;段晴月;;经典Wnt通路调控骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞的分化[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
3 黄秀榕;祁明信;李坤鹏;陈义;;尾加压素Ⅱ体外促进晶状体上皮细胞增殖的细胞信号转导机制[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
4 佟红艳;梅琛;李空飞;胡超;金洁;;Wnt拮抗基因在骨髓增生异常综合征患者中甲基化水平分析[A];2011年浙江省血液病学术年会暨浙江省医学会血液病学分会成立50周年庆典论文汇编[C];2011年
5 詹敏;李志英;;内障丸加减方对氧化损伤晶状体上皮细胞作用的透射电镜观察[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
6 左玮;王文;;莫诺苷对缺血再灌注损伤大鼠脑组织中Wnt信号通路相关因子表达的影响[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
7 孙芳玲;左玮;张丽;艾厚喜;王文;;莫诺苷对缺血再灌注损伤大鼠脑组织中Wnt信号通路相关因子表达的影响[A];第一届全国麻醉药理专业委员会第二次学术会议论文集[C];2011年
8 李福伦;李斌;;Wnt信号通路与创伤愈合[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
9 杨大志;郭晓东;郑启新;;wnt通路在雷尼酸锶在治疗骨质疏松大鼠中的研究[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年
10 张应花;崔卫刚;孙燕;徐冲冲;王飞;彭裕文;李瑞锡;;Wnt信号通路与氧化应激在孤独症模型鼠脑内的作用[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 包秀丽;Wnt信号诱导人晶状体上皮细胞上皮间充质转化和增殖的研究[D];天津医科大学;2012年
2 张一栋;1.8GHz微波辐射对人晶状体上皮细胞蛋白质表达影响的研究[D];浙江大学;2012年
3 张志勇;小窝蛋白-1在高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡调控中的作用[D];浙江大学;2009年
4 邢星;组织型转谷氨酰胺酶在后囊膜混浊中的作用研究[D];华中科技大学;2010年
5 柳珑;GEFT调节晶状体上皮细胞分化的机制研究[D];湖南师范大学;2011年
6 孙志成;SFRP2通过经典Wnt信号通路调控增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及相关功能的机制研究[D];第三军医大学;2011年
7 刘娜;炎症微环境影响下Wnt信号通路对牙周膜干细胞骨向分化的调控机制研究[D];第三军医大学;2011年
8 谌崇峰;从Wnt途径探讨高压氧促离体神经干细胞分化机制[D];中南大学;2010年
9 沈松菲;急性白血病组蛋白甲基化和DNA甲基化的相互作用及对Wnt信号通路的调控研究[D];福建医科大学;2011年
10 张应花;孤独症模型大鼠经典Wnt信号通路与氧化应激变化的研究[D];复旦大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 金海鹰;晶状体上皮细胞端粒酶活性及衰老、凋亡的实验研究[D];暨南大学;2003年
2 冯希敏;LY294002对bFGF诱导的兔眼晶状体上皮细胞增殖的影响[D];郑州大学;2010年
3 李凤至;激活素A抑制人晶状体上皮细胞增殖的实验研究[D];吉林大学;2011年
4 李姗姗;七叶皂苷钠体外对大鼠紫外线所致晶状体上皮细胞NF-κB表达的影响[D];兰州大学;2011年
5 王真;经典Wnt信号传导通路在盆腔器官脱垂发病机制中的作用[D];北京协和医学院;2012年
6 董金山;经典WNT信号通路在骨髓间充质干细胞分化为成牙本质样细胞中的作用体外实验研究[D];第四军医大学;2010年
7 刘亚会;人晶状体上皮细胞中bax的表达与白内障形成的相关性研究[D];大连医科大学;2010年
8 李丹;PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞增殖的影响[D];中国医科大学;2010年
9 刘瑜;谷氨酰胺体外对大鼠晶状体上皮细胞HSP70和NF-κB表达的影响[D];兰州大学;2011年
10 修鑫鑫;茶多酚对紫外线诱导大鼠晶状体上皮细胞中Caveolin-1、MMP-2表达的影响[D];辽宁医学院;2012年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 张中桥;白内障与晶状体上皮细胞改变有关[N];中国医药报;2002年
2 王振岭;消化分离法培养人晶状体上皮细胞[N];中国医药报;2002年
3 余宁宁 李水根;后发性白内障发生机理探明[N];健康报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978