收藏本站
收藏 | 论文排版

Y染色体AZF微缺失的遗传特性及应用PGD的临床意义

张玥  
【摘要】:目的:第一部分:分析华北地区男性不育人群中AZF微缺失的发生率及不同的缺失类型对表型的影响,探讨检测AZF微缺失的临床意义。第二部分:研究AZF微缺失对生殖激素及睾丸发育的影响。第三部分:分析AZF微缺失患者行ICSI-ET治疗后的胚胎受精率、卵裂率、优胚率、着床率、临床妊娠率及早期流产率等指标,探讨AZF微缺失对ICSI-ET结局的影响。第四部分:利用多重置换扩增(MDA)结合多重PCR对男性不育患者行ICSI后的卵裂期男性胚胎行AZF微缺失检测,探讨AZF微缺失的遗传规律,为患者更合理地选择移植胚胎和更确切地遗传咨询提供依据。第五部分:比较接受/拒绝行PGD筛选女性胚胎移植的AZF微缺失患者的妊娠结局,为建议患者行PGD治疗提供临床依据。方法:第一部分:研究对象为2012年1月~2013年8月于天津市中心妇产科医院生殖医学中心就诊的非梗阻性无精子症患者(排除输精管阻塞等因素)73例、严重少精子症患者90例及轻中度少精子症患者63例(精液分析均按WHO标准:连续2次精液分析并经离心沉淀镜检未见精子者为无精子症;精子密度5×106/ml者为严重少精子症;精子密度在5~20×106/ml之间者为轻中度少精子症)。选取30例已正常生育的健康男性为对照。留取上述患者及对照组外周血2 m L,乙二胺四乙酸盐(EDTA)抗凝,置于-20℃冰箱保存。采用盐析法提取DNA,选取15个位点进行AZF微缺失检测:包括AZFa区的s Y82、s Y84、s Y86;AZFb区的s Y 124、s Y127、s Y128、s Y133、s Y134、s Y143;AZFc区的s Y239、s Y242、s Y254、s Y255;AZFd区的s Y145、s Y152。将这15个位点组成4套多重PCR系统,分别为系统I:SRY、s Y254、s Y 143、s Y 242、s Y 255;系统II:SRY、s Y 84、s Y 239、s Y 152;系统III:SRY、s Y 86、s Y 127、s Y 145、s Y 124;系统IV:SRY、s Y 134、s Y 82、s Y 128、s Y 133。每套系统中以SRY基因作为内控,同时以空白和已正常生育的男性作为外控。第二部分:留取上述226位男性不育患者的血清,应用酶联免疫法测得血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T),与30例以正常生育的健康男性(对照组)相比较,分析其统计学差异。同时,测量并比较睾丸大小。第三部分:分析10例AZF微缺失患者的13个ICSI周期的ICSI-ET结局,与同期治疗的82例无AZF微缺失的严重少精子症或无精子症患者共98个ICSI周期结局相比较,分析两组间患者的受精率、卵裂率、优胚率、着床率、临床妊娠率和早期流产率的统计学差异。第四部分:选取10例AZF微缺失患者的13个ICSI周期的剩余无冷冻价值的2pn、1pn卵裂期胚胎62个,及无AZF微缺失患者ICSI周期剩余无冷冻价值的2pn、1pn卵裂期胚胎62个,显微操作获得单个卵裂球并采用多重置换扩增技术(MDA)进行全基因组扩增,后采用PCR进行性别鉴定,最终对61个男性胚胎行AZF微缺失检测。第五部分:将4位接受PGD筛选女性胚胎移植的AZF微缺失患者的妊娠结局与6位拒绝PGD筛选女性胚胎的AZF微缺失患者ICSI后的妊娠结局相比较。结果:第一部分:226例男性不育患者行AZF微缺失检测,共23例AZF微缺失,总缺失率为10.18%(23/226),其中无精子症组、严重少精子症组和少精子症组患者的缺失率分别是12.33%(9/73)、13.33%(12/90)、3.17%(2/63);对照组(30例正常男性)均未发现AZF基因微缺失。无精子症组和严重少精子症组患者AZF微缺失率明显高于轻中度少精子症组,差异有统计学意义(P0.05)。23例AZF微缺失患者中,单纯AZFc缺失率为3.98(9/226),AZFc+d缺失率为3.54%(8/226),单纯AZFa缺失率为1.77%(4/226),AZFb+c缺失率为0.44%(1/226),AZFa+b+c缺失率0.44%(1/226)。第二部分:在无精子症和严重少精子症患者中,AZF微缺失组的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平明显高于无缺失组(P0.05);睾酮(T)水平和睾丸体积明显低于无缺失组(P0.05)。轻中度少精子症患者中,AZF缺失组与无缺失组相比较,各项指标无统计学差异(P0.05)。第三部分:AZF微缺失组患者的ICSI受精率明显低于对照组,有统计学差异(P0.05);胚胎卵裂率、优质胚胎率、胚胎着床率、临床妊娠率亦低于对照组,但无统计学意义(P0.05);对照组早期流产率亦略降低,亦无统计学差异(P0.05)。此结果提示AZF微缺失对ICSI治疗结局可能有一定影响,但与无缺失组有同样机会拥有自己的后代,尚需扩大样本研究进一步证实。第四部分:(1)MDA扩增成功率为93.5%(116/124),经性别测定,其中男性胚胎61个、女性胚胎55个。(2)AZF检测结果:对61个男性胚胎(包括AZF微缺失患者的28个男胚;Y染色体无缺失患者的33个男胚)行AZF微缺失检测:AZF微缺失患者的28个男性胚胎全部存在不同范围的缺失(23个胚胎与父辈AZF缺失类型相同,5个胚胎缺失范围扩大)。AZF无缺失患者的33个男性胚胎中有6例病人的9个男胚出现de novo缺失,de novo缺失率达27.3%(9/33)。第五部分:将4位(5个周期)接受PGD筛选女性胚胎移植的AZF微缺失患者的妊娠结局与6位(8个周期)拒绝PGD筛选女性胚胎的AZF微缺失患者ICSI后的妊娠结局相比较,两组受精率、卵裂率、优胚率等均无统计学差异(P0.05)。接受PGD组患者共获得21个女性胚胎,着床率为27.3%,临床妊娠率为40%,无早期流产,顺利生下2个健康女婴;拒绝PGD组着床率为21.4%,临床妊娠率为42.9%,1例早期流产(33.3%),生下1个健康女婴和1个与父辈缺失类型相同的男婴。结论:1.本地区严重少精子症患者的AZF微缺失率最高,无精子症患者次之,两者缺失均以AZFc区微缺失率最高;AZFa微缺失仅见于无精子症患者中;男性不育患者常规筛查AZF对临床诊疗有重要的指导意义。2.本研究证实AZF微缺失影响患者性腺发育,导致睾丸体积偏小、FSH及LH水平增高、T水平明显降低,最终导致不育。3.AZF微缺失可能对ICSI-ET治疗有一定影响,可导致受精率降低,但卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、早期流产率与对照组相比较无统计学意义,故AZF微缺失对ICSI治疗的影响还需更大样本量的研究证实。4.AZF微缺失可通过ICSI技术从父代遗传给子代,并在遗传过程中可发生de novo微缺失(即突变缺失:子代有缺失而父代未见缺失)和缺失范围扩大。5.AZF微缺失患者中,接受PGD技术筛选女性胚胎不降低临床妊娠率,亦可减少早期胚胎流产率,避免将这一基因缺陷人为地遗传给男性后代。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 朱晓斌;郭安亮;曹小蓉;刘勇;孙序序;姚见儿;王毅;王益鑫;李铮;;改良多重聚合酶链反应检测Y染色体AZF微缺失[J];中华男科学杂志;2006年03期
2 唐智国;梁朝朝;;Y染色体微缺失诊断不育症研究进展[J];国际泌尿系统杂志;2006年04期
3 杨联云;魏礁;;合川地区精子发生障碍患者Y染色体微缺失基因诊断的研究[J];中国优生与遗传杂志;2006年09期
4 戴汝琳;李付彪;李哲;许宗革;许秉乙;刘睿智;;324例男性不育患者Y染色体微缺失分析[J];中国实验诊断学;2008年12期
5 李练兵;吕静;马明福;李新生;陈晓星;赵乐天;;不育患者Y染色体AZF微缺失的分析[J];中国优生与遗传杂志;2008年06期
6 邵法明;虞建达;缪起龙;平萍;戴继灿;朱晓斌;刘玉林;郭安亮;李铮;;Y染色体微缺失分子诊断的意义(附122例报告)[J];中国男科学杂志;2008年06期
7 张介平;施晓波;曾莹;吕立夏;朱文斯;;液态芯片技术检测Y染色体微缺失方法的优化[J];同济大学学报(医学版);2008年05期
8 徐巧霖;徐键;;Y染色体微缺失的研究新进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2008年06期
9 祝茹;彭弋峰;马旭;杨本海;徐庆阳;方祥;俞丽华;皮静萍;;皖南地区非特发性男性不育患者Y染色体微缺失的研究[J];皖南医学院学报;2009年01期
10 朱春晖;梁季鸿;梁世坤;韦国强;梁兵;宋卫儒;张迅;;Klinefelter综合征Y染色体微缺失的检测[J];中国现代医学杂志;2009年17期
11 纪冬梅;冯云;李铮;张爱军;曹小蓉;刘勇;杨一华;朱晓斌;;810例严重少(无)精子症患者Y染色体微缺失筛查与分析[J];中国优生与遗传杂志;2010年02期
12 高云;陈嘉昌;彭焕玉;朱振宇;;Y染色体微缺失及其检测方法[J];分子诊断与治疗杂志;2011年05期
13 姜碧;;266例男性原发不孕患者染色体核型及Y染色体微缺失分析[J];当代医学;2011年23期
14 朱晓红;王晓梅;张艳萍;王毅;马旭;;国产与进口Y染色体微缺失筛查试剂的评估性研究[J];中国计划生育学杂志;2011年10期
15 李佑志;陈之遥;王慧;黄欢;宋沁馨;周国华;;高通量水凝胶芯片检测Y染色体微缺失方法的建立[J];中华男科学杂志;2012年02期
16 张秋芳;常亮;赵楠;邵敏杰;高雪峰;乔杰;姜辉;;Y染色体微缺失与精子发生的相关性分析[J];中国性科学;2012年02期
17 桂俊豪;王瑞;刘鸿春;曹金军;宋云宏;杨柳;黄国香;苏晓津;邹红云;何江;余伍忠;;多重PCR技术在Y染色体微缺失快速筛查中的应用[J];国际检验医学杂志;2012年06期
18 王丽娟;宋成;黄菊;伍慧丽;吴彤华;胡晓东;曾勇;;Y染色体微缺失对卵胞质内单精子注射胚胎情况和临床结局的影响[J];生殖与避孕;2012年07期
19 刘晓红;闫丽盈;李蓉;乔杰;;Y染色体微缺失与辅助生殖技术关系的研究进展[J];生殖与避孕;2013年01期
20 顾斌;程洪波;陈瑛;李海波;刘敏娟;丁洁;杨慎敏;王玮;;不育患者Y染色体微缺失的检测与分析[J];中国妇幼保健;2013年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵永平;王晓峰;沈浣;白文俊;李青;徐涛;朱积川;;Y染色体微缺失和反复性流产[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年
2 桂俊豪;王瑞;刘鸿春;袁兰;杨柳;黄国香;邹红云;余伍忠;;多重PCR技术在Y染色体微缺失快速筛查中的应用[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
3 李铮;朱晓斌;邵法明;张锋;刘勇;曹小蓉;龚东明;刘玉林;郭安亮;姚见儿;王益鑫;;男子不育症相关的Y染色体微缺失基因组学研究[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
4 朱春晖;梁季鸿;梁世坤;韦国强;梁兵;宋卫儒;张迅;;低促性腺激素性性腺功能减退症患者Y染色体微缺失的检测[A];中华医学会第二届糖尿病及性腺疾病学术会议论文集[C];2012年
5 王松;曲宝旺;逄建涛;谭爱国;姚志建;周骋;;多重PCR法检测Y染色体微缺失方法学建立及在男性不孕不育诊断中的临床意义[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
6 吴芳;白晓红;宋学茹;杨琳;;251例不育男性Y染色体微缺失及生殖激素水平的研究[A];2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨生殖健康讲习班论文汇编[C];2011年
7 桂俊豪;刘鸿春;王瑞;袁兰;黄国香;邹红云;余伍忠;;多重PCR技术在Y染色体微缺失快速筛查中的应用[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
8 翁兰英;黄建贞;;无精症严重少精症患者Y染色体微缺失多重PCR筛查及意义[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
9 徐晨明;叶英辉;金帆;;无精症患者Y染色体微缺失的快速筛查[A];全国中西医结合生殖健康学术研讨会论文及摘要集[C];2004年
10 宋勤浩;苗正友;刘晓丹;吴秀;;微阵列比较基因组杂交技术产前检测染色体微缺失[A];第九届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会暨产前诊断和医学遗传学新技术研讨会论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 张玥;Y染色体AZF微缺失的遗传特性及应用PGD的临床意义[D];天津医科大学;2014年
2 宋宁宏;严重少精子和无精子的不育患者Y染色体微缺失的研究[D];南京医科大学;2007年
3 戴汝琳;Y染色体微缺失及其遗传特性影响男性不育的相关性研究[D];吉林大学;2012年
4 龚启华;心脏圆锥动脉干畸形22q11.2微缺失的研究[D];中南大学;2008年
5 王瑞雪;Y染色体异常对男性生育的影响[D];吉林大学;2011年
6 李凌;二维、三维超声检测胎儿胸腺及胎儿先心病与22q11微缺失关联性探讨[D];中南大学;2010年
7 赵巍;成人简单—中等复杂程度先天性心脏病拷贝数变异的高分辨率遗传学分析[D];吉林大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙碧珂;Y染色体微缺失与男性不育的相关性研究[D];河北联合大学;2014年
2 王昊;8种微缺失综合征荧光原位杂交诊断体系的建立与应用[D];中南大学;2008年
3 蒲春林;新疆地区汉族维族不育症患者Y染色体微缺失分析[D];新疆医科大学;2007年
4 梁钰龙;口腔脱落细胞检测Y染色体微缺失[D];浙江大学;2011年
5 孙丰涛;男性原发不育患者Y染色体微缺失研究及细胞遗传学分析[D];天津医科大学;2012年
6 许娜;313例男性不育患者Y染色体微缺失与染色体核型分析的研究[D];河北医科大学;2011年
7 刘圣英;男性不育中Y染色体微缺失的研究[D];安徽医科大学;2005年
8 陈晓亮;101例原发无精子和严重少精子症患者Y染色体微缺失临床分析[D];吉林大学;2008年
9 刘祥印;无精子症与严重少精子症患者Y染色体微缺失研究[D];吉林大学;2008年
10 蔡文娟;1.血清抑制素B在鉴别梗阻性与非梗阻性无精子症中的应用价值 2.非梗阻性无精子症患者Y染色体微缺失的研究[D];中国协和医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 张中桥;男性不育与Y染色体微缺失相关[N];科技日报;2002年
2 本报记者 汤江峰 本报 通讯员 邹永华;Y染色体微缺失导致男性不育[N];大众卫生报;2005年
3 ;中国人原发无精与少精症Y染色体无精症因子区域微缺失的临床基因诊断研究[N];中国医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978