PD-1调节自身免疫性肝炎肝硬化患者脾切除后免疫耐受功能的研究

【摘要】：研究背景:自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)的发病与免疫系统功能紊乱有关,AIH肝硬化患者预后差,由于存在诸多禁忌症而不能使用免疫抑制进行有效的治疗。AIH肝硬化患者常常伴随脾功能亢进,脾切除治疗后可以有效缓解门静脉高压症状。我们以往的研究证实了脾切除可以减少患者脾功能亢进的症状,改变机体的免疫状态,本研究将在AIH肝硬化患者体内研究脾切除对其免疫细胞分化和免疫环境的影响,从而阐明其影响AIH肝硬化患者免疫功能的机制。本研究将在AIH肝硬化患者和动物模型中,进一步研究脾切除对其免疫细胞分化和免疫环境产生影响的通路,寻找可干预的潜在靶点。研究对象:本研究纳入从2005年1月份至2016年12月份,在天津医科大学总医院消化科和普通外科经过临床及病理检查,确诊自身免疫性肝炎肝硬化患者20例,脾切除后8例患者,另外慢性肝炎(乙肝)肝硬化患者30例,脾切除后15例患者作为对照。收集患者的外周血检测血常规,肝功能和免疫学指标;检测外周血中趋化因子和细胞因子的表达变化;利用流式细胞术检测外周血CD4+,CD8+T细胞亚群的比例变化;进一步研究与免疫耐受相关的巨噬细胞亚群的分化情况。利用刀豆蛋白(Con A)建立模型,研究脾切除对于CD8+T细胞表面PD-1(Programmed death-1)等分子表达的影响,以及对于糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体GITR(glucocorticoid—induced tumor necrosis factor receptor)和关键转录因子NF-κB表达的影响,讨论T细胞耗竭与AIH发生发展的关系。研究结果:我们的研究发现,AIH肝硬化患者切脾随访6个月后其临床和生化指标显著改善,脾功能亢进相关症状好转。脾切除可以抑制免疫趋化因子CXCL9和IP-10的表达,抑制CD4+T细胞的过度活化,增加外周血CD8+T细胞的比例。和对照组患者相比,AIH肝硬化患者以M1型巨噬细胞活化为主,脾切除促进免疫耐受相关的CD14+CD16+CD206+CD163+M2c型巨噬细胞增多,促使AIH肝硬化患者中M1型巨噬细胞向M2型转化,可能与促进组织的修复,减少自身免疫反应对肝细胞的破坏有关。进一步我们发现,AIH肝硬化患者肝脏内CD8+T细胞增多,利用外周血进一步分析,脾切除患者外周血中CD8+T细胞表达PD-1上调,同时伴随CD160上调和4-1BB表达抑制,而且,与激素调节有关的GITR信号也在脾切除后患者的外周血中上调。进一步研究与控制上述分子表达的核内转录因子NF-κB的二聚体组分,发现脾切除可以促进p50-p50二聚体的DNA结合活性,这有助于抑制过度的免疫反应。研究结论:脾切除可以改善AIH肝硬化患者的临床和生化指标,脾功能亢进的缓解有助于增加患者使用免疫抑制剂使用的机会。脾切除不仅可以增加免疫抑制相关的M2c型巨噬细胞的比例,还可以促进CD8+T细胞表达PD-1分子上调,诱导T细胞耗竭表型表达,为AIH肝硬化患者未来治疗提供了新的思路。