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低剂量铬暴露促进前列腺癌细胞增殖进展的机制探索

王宝龙  
【摘要】:目的:探索低浓度铬暴露促进前列腺癌细胞生长的可能机制,探讨CEBPB通过IL6/STAT3信号通路在铬促进的前列腺癌细胞生长中的作用和机制,探讨TGF-β-EMT信号通路在促进低浓度铬暴露前列腺癌进展中的作用和机制。方法:1)使PC3处于低浓度铬暴露环境中。通过MTT等方法检测PC3细胞在低浓度铬暴露下的生长情况。收集细胞总RNA和总蛋白,实时荧光定量PCR检测CEBPB mRNA表达水平,WB法检测CEBPB蛋白表达水平。合成了靶向CEBPB的siRNA,并通过Lipofectamine 3000转染到前列腺癌PC3细胞系中。通过实时荧光定量PCR检测CEBPB mRNA的表达。MTT法检测转染前后PC3细胞的生长能力。2)收集细胞总RNA,分泌蛋白和总蛋白,并通过实时荧光定量PCR检测IL6的mRNA表达水平。通过ELISA和WB实验检测IL6的蛋白表达水平,通过WB实验检测磷酸化STAT3和总STAT3的表达水平。探讨IL6/STAT3信号通路在该过程中的作用,并通过小分子抑制剂抑制STAT3的活化,MTT法检测抑制IL6/STAT3信号通路后PC3细胞生长能力的变化;3)通过WB检测低浓度暴露后的PC3细胞中TGF-β的水平,推测其促进前列腺癌细胞体外侵袭过程中有一定作用,并通过检测EMT途径中相关因子的表达来检测TGF-β是否激活EMT途径。用TGFβsiRNA特异性降低其水平后,测定各EMT途径相关因子表达,明确是否能够翻转其异常表达。结果:1)发现暴露于低浓度的铬显著促进了前列腺癌细胞系PC3的生长。结果表明,低浓度的铬暴露显著上调了前列腺癌细胞系PC3中CEBPB RNA和蛋白的表达。在siRNA敲低CEBPB表达后,低浓度铬暴露促进前列腺癌细胞PC3的生长受到显著抑制;2)实验结果表明,低浓度的铬暴露可以显著上调前列腺癌细胞系PC3中IL6 mRNA的表达。并能显著上调前列腺癌细胞系PC3中IL6和总蛋白的表达,显著上调中磷酸化STAT3的水平。在抑制STAT3的活性后,由低浓度的铬暴露促进的前列腺癌细胞PC3的生长被显著抑制。用siRNA敲低CEBPB的表达后,IL6的mRNA和蛋白表达下调,磷酸化STAT3的水平下降,IL6/STAT3信号通路被抑制;3)实验结果表明,低浓度暴露后的PC3细胞中TGF-β的水平明显升高,EMT途径相关因子的表达显著升高。用TGFβsiRNA特异性降低其水平后,各EMT途径相关因子异常表达被逆转。结论:1)低浓度铬暴露可显著促进前列腺癌细胞系PC3的生长;2)通过上调前列腺癌细胞系PC3中CEBPB的表达水平,低浓度的铬暴露,激活IL6/STAT3信号通路,促进前列腺癌细胞侵袭的进展;3)低浓度的铬暴露可能通过TGF-β-EMT信号通路在促进前列腺癌进展。


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