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肾疏宁治疗系膜增生性肾炎的疗效评价及其对系膜基质硬化和相关因素影响的实验研究

黄怀鹏  
【摘要】: 目的: 系膜增生性肾炎是慢性肾小球肾炎中最常见的一种病理类型,其主要病理 特征是系膜细胞增生和细胞外基质扩张,而细胞外基质的大量积聚是导致肾小 球硬化的关键因素,本研究从临床病理、动物实验、体外培养肾小球系膜细胞 三方面来探讨肾疏宁的临床疗效和其对肾小球系膜基质硬化及相关因素的影 响,探讨该方防治肾小球炎症及硬化的作用机理。 方法: (1)临床研究 选用30例经肾穿刺活检确诊为系膜增生性肾炎、中医辨 证分型为气阴两虚、肝肾阴虚的患者,给予肾疏宁治疗,从主要症状、生化、 病理、免疫、凝血机制的变化,评价肾疏宁的临床疗效。 (2)动物实验 综合应用尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B(0.4mg/kg、实验 的第1d和第8d),隔日口服牛血清白蛋白(2mg),定期注射弗氏佐剂(0.2ml、 实验的第8d和第15d),复制大鼠系膜增生性肾炎(MsPGN)模型。给予肾疏宁 治疗,同时设肾炎康复片为对照组,观察治疗前后肾脏形态学、超微结构及免 疫复合物沉积的情况,利用免疫组化、酶联免疫法(ELISA)、逆转录-多聚酶 链反应(RT-PCR),观察肾疏宁对MsPGN大鼠肾组织系膜基质中IV胶原(ColIV)、 纤维连接蛋白(FN),转化生长因子β_1(TGF-β_1)、细胞间粘附分子(ICAM-1) 的影响。 (3)细胞培养 采用肾小球系膜细胞体外培养技术,利用血清药理学方 法,制备肾疏宁含药血清,应用MTT、ELISA、RT-PCR等方法,将血管紧张素 Ⅱ作为一种刺激因子,在不同时间(4h、8h、16h、32h),观察不同浓度(2.5%、 5%、10%)的肾疏宁血清对正常和病理状态下系膜细胞增殖和细胞外基质成分 及TGF-β_1、ICAM-1的影响。 结果: (1)临床研究表明:肾疏宁能明显改善MsPGN患者治疗前后的主要症状, 降低尿蛋白,提高血浆蛋白,控制血尿,改善脂质代谢,调节免疫、高凝状态。 (2)动物实验表明:肾疏宁能明显降低MsPGN大鼠的蛋白尿,提高血浆 蛋白,改善肾功能,抑制肾小球系膜细胞增生和细胞外基质的扩张,对损伤的 肾组织有修复能力,与肾炎康复片组相比有显著性差异(p<0.05)。 免疫组化研究发现:在MsPGN大鼠肾组织中,,ColIV主要分布于系膜基质 和基底膜及肾间质部位,FN主要分布在包曼氏囊及肾小球系膜基质,在基底 膜上着色浅淡。正常组有FN、ColIV的弱表达,与正常组相比,模型组的FN、 ColIV的染色范围显著增强(p<0.01),肾疏宁组的FN、ColIV的染色范围较模 型组相比,显著减少(P<0.01),肾炎康复片组的染色范围较模型组小(P<0.05), 肾疏宁组与之相比,亦有明显差异(P<0.05)。ICAM-l主要分布于系膜基质和 肾小球的大血管内皮细胞、某些肾小囊的上皮细胞及小管间质部位。正常组有 ICAM-1的弱表达,与正常组相比,模型组的ICAM-1染色范围显著增强(P<0.01), 肾疏宁组的ICAM刁的染色范围较模型组相比,显著减少…的.of人 肾炎康复 巳 片组的染色范围较模型组小,经统计学处理有明显差异k狈.05入肾疏宁组 与之相比,亦有明显差异(P<0.05)。正常组 TGF 6;肾小球有极其微弱的表达, 而在肾间质的分布较在肾小球内多。模型组可以见到 TGF 6;大量分布在包曼氏 ”囊、肾小球的基底膜、血管内皮,同时在肾间质的分介亦明显增多,部分呈团 块状。肾疏宁组TGF p,在肾小球的分布较模型组相比明显减少,有极显著性差 异…m.of),而与肾炎康复片组相比,亦有显著性差异km 05人 采用HPIAS*00病理图像分析系统分析后表明,肾疏宁组能减少细胞外 基质中 COI IV、FN及 ICAM习、TGF-P;等炎症介质在肾小球系膜区的沉积,与 肾炎康复片组相比,有显著性或极显著性差异…m.05或P刃.01X RT-PCR结果亦表明肾疏宁能下调MSPGN大鼠肾组织中COllVJN及ICAM-1、 TGF-p;等炎症介质的mRNA水平。 (3)细胞培养结果表明:肾疏宁血清能抑制正常和病理培养条件下的系 膜细胞增殖并呈现一定的量效关系,在血管紧张素*(AT 11)刺激后,细胞外 基质中C。IW、FN的分泌在16h达到高峰,32h时开始回落,ICAM-1、TGF-p; 的分泌高峰在 AT 11刺激后 32h时出现,肾疏宁能抑铝 C。IIV、FN及 ICAM-l、 TGF-6;的分泌并且呈现一定的量效关系。细胞RT干CR结果也证实肾疏宁血清 对正常和病理培养条件下的CollV、FN及ICAM-1、TGF-i,的mRNA表达有抑制 作用 ##: 肾疏宁是治疗系膜增生性肾炎的有效方剂之一,在体和离体实验均表明肾 民 疏宁能明显抑制细胞外基质中 Co N、FN的分泌及其 mRNA的表达,其机理可 J 能与肾疏宁降低ron-p;的含量和下调其m删n水平有关/肾疏宁亦能降低细胞 粘附分子-1(ICAM-1)的合成和下调其 mRNA表达,可能


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