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针刺对脑出血模型大鼠神经细胞内钙离子稳态调节及脑组织SODmRNA表达影响的实验研究

田成举  
【摘要】: 目的:通过针刺对脑出血模型大鼠的脑细胞内Ca~(2+)浓度及SODmRNA表达的变化,来探讨脑出血病的发生、发展过程中,针刺对神经细胞内Ca~(2+)浓度的变化、Ca~(2+)颗粒的分布的改变,以及对SODmRNA表达水平的影响。进一步阐述脑出血后Ca~(2+)与SOD之间相互影响的关系,从细胞生物学、分子生物学方面来探讨针剌对脑出血的作用机理。为临床提供更为新的更有价值的、可靠的理论依据。 方法:采用脑内注入VII型(?)原酶诱导脑出血模型,同时设立正常组、假手术组、针刺组、脑出血组,其中脑出血组、针刺组按不同时相分别在5min,15min,30min,60min,180min观察脑组织细胞内Ca~(2+)变化及针刺对其的影响和3h,6h,24h,3d,7d观察脑组织SODmRNA表达变化及针刺对其的影响。对脑组织细胞内Ca~(2+)变化检测采用荧光指示剂Fara-2测定细胞Ca~(2+)原理和Ca~(2+)电镜细胞化学技术;利用原位杂交技术结合计算机图像分析,观察脑组织SODmRNA表达变化及针刺对其的影响。 结果:脑出血5min时,内质网的Ca~(2+)含量略减少,而细胞核、细胞浆、线粒体的Ca~(2+)含量则略增加,此时,未引起细胞超微结构的变化,随着Ca~(2+)内流增多,引起内质网、细胞核内的Ca~(2+)紊乱和线粒体、细胞浆内Ca~(2+)超载,线粒体数量减少,结构受到破坏,内质网扩张,线粒体肿胀。脑出血30min—60min,由于Ca~(2+)大量内流,细胞内各细胞器均发生变化,内质网内Ca~(2+)严重丢失,细胞核、细胞浆、线粒体内Ca~(2+)严重超载,导致细胞结构严重破坏,核固缩,胞质空化,细胞器减少等,180min,虽然Ca~(2+)超载略减轻,但细胞结构损伤依然很重,细胞膜结构不完整,内质网呈扩张状态等,针刺可良性调节各时相细胞器Ca~(2+)含量,减轻细胞内Ca~(2+)紊乱、超载,保护脑组织。 实验性脑出血可诱导Cu-ZnSOD基因在脑出血周围区(皮质)、海马、纹状体的异常表达,脑出血3h可见Cu-ZnSODmRNA表达上调,并随时间延长而增 中丈摘要 强,到24h达到高峰,然后,各脑区CoZns0DmRNA的表达逐渐减少,并与 7d趋于对照组水平,针刺组各时程Cu一ZnSODmRNA的表达均低于同时程脑出 血组,但仍高于对照组水平.提示针#.J可使脑出血后各脑区组织的 Cu一ZnsODmRNA表达下调,对脑出血造成的神经元损伤有保护作用. 结论:(l)脑出血后,导致脑血肿、脑水肿,引起脑出血周围组织缺血缺 氧,神经细胞内Ca2+超载;同时神经细胞亚细胞内的c矛十时间和空间分布发生 异常改变,神经细胞结构破坏;以60min最为显著.针刺可抑制神经细胞c扩十 内流,减轻ca2+超载,保护脑组织。(2)脑出血后,脑组织内cu一zns0Dm洲A 表达3h开始上调,24h达到峰值,针刺可使脑组织的Cu一ZnSODmRNA表达下 调,减轻脑组织损伤.


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